第一讲电镜技术.ppt

电镜技术与细胞超微结构基础 重庆医科大学生命科学研究院 罗子国 前 言 电子显微镜（Electron Microscope , EM)简称电镜，它是用电子束代替可见光的显微装置，一种高放大、高分辨的大型精密仪器。目前电镜已广泛应用于包括医学在内的各个领域。 EM在光学显微镜基础上使细胞学的概念更加完善，对疾病的认识,特别是对发病机理的研究做出了巨大贡献.为人类认识自我发挥了重要作用。 第一讲 电镜基本原理及在医 学中的应用 一、细胞学理论的发展史（显微镜的发展史） 人眼分辨率:0.2mm 17世纪中叶Hooke（1665）发明 L.M:0.2um 19世纪中叶1861 细胞学说建立 1932年Ruska 和 Knoll 发明了E.M , X 12 1935年E.M基本定型 1939年第一台商品电镜(德国西门子公司） 分辨率 优于10nm 二、电镜基本工作原理 电子显微镜与光学显微镜不同之处在于用电子束光源代替了可见光光源,通常使用热电子发射的方法产生电子束,电子束具有以下基本特性: （1）.电子束由电子组成，快速运动的电子在真空中呈直线前进，并具有波动性，其波长与加速电压有关。 （2).电子束在电场或磁场中，会受到电力或磁力的作用。（3）.电子束能穿过极薄的样品，并产生二次电子，背散射电子，特征X射线等。 因此基于这些特性设计出的电子显微镜结构非常复杂。 (一）分辨率、反差与形态研究的关系 光学显微镜的分辨率比较低，只能观察到大于0.25um的结构，主要受透镜的像差和光波的衍射影响,要观察细胞内和细胞间许多结构则无能为力。 什么是分辨率呢？ 1、分辨率（Resolution） 又称分辩本领（Resolving power），是将邻近两点清晰区分、辩认的能力，用能被辨认的邻近两点的距离表示。 肉眼：在明视距离（25cm）时，为0.25mm； LM：可见光的平均波长为500nm，r=λ/2，LM的极限分辨率为0.25um; EM：电子波波长短,且波长随加速电压的增高而更短，目前较好的电镜分辨率为0.2nm左右,比LM提高1000倍,比人眼提高100万倍. (注)：①由于电镜存在各种像差（包括球差、像散等）,限制了分辨率,不能真正达到其波长的一半; ②分辨率还受到许多因素的影响,如切片的厚度等，超薄切片较薄时,分辨率可达1～2.5nm,切片较厚时,实际分辨率为5～10nm. （三）、电镜工作原理（与光镜的比较） 1、电镜与光镜光路图的比较 电子显微镜 光学显微镜 照射 电子束 光束 波长 0.859nm(20kV) 500nm(可见光) 0.37nm(100kV) 200nm(紫外光) 介质 真空 空气 透镜 电磁透镜 玻璃透镜 聚焦 电聚焦 机械 反差 散射吸收、衍射、相位 吸收、反射 显像方式 荧光屏 直接观察 2、电镜的分类 （1）透射式电子显微镜（Transmisson EM） （2）扫描电子显微镜（Scanning EM） （3）分析电子显微镜（Analytical EM） （1）、透射式电子显微镜 I、TEM的基本结构 照明系统（真空系统）——样品室—— 成像系统——观察记录系统 II、透射电镜的成像原理 III、透射电镜的用途 （2）扫描电子显微镜 I、SEM的基本结构 照明系统（真空系统）——扫描系统 ——检测器 II、SEM的成像原理 III、SEM的用途 （3）、分析电子显微镜 分析电子显微镜是透射电镜或扫描电镜与X