流动剪切力对体外培养的人脐静脉内皮细胞原癌基因蛋白表达的影响研究.pdfVIP

流动剪切力对体外培养的人脐静脉内皮细胞 原癌基因蛋白表达的影响’ 李彩霞 曾衍钧t. 廖东华 (北京工业大学生物医学工程中心，北京 100022) 胡金麟 (中国人民解放军总医院微循环研究室，北京 100853) 摘要:本文的研究目的是揭示不同的流动剪切力对体外培养的人脐静脉内皮细胞 c-fos 和c-myc蛋白表达的不同影响。我们利用平行板流动小室装置控制剪切力大小和持续时间。 然后用免疫组织化学方法对受剪切力作用后的内皮细胞进行染色并进行图象分析。得到一 些重要结论。c-fos蛋白表达在静态时非常低，4dyneslcm-和 1Odyneslcmz的剪应力都可诱 导c-fos蛋白水平迅速增加，尤其是lOdyneslcm=的剪应力。井随时间的增加而增加，到1.0 小时达到高峰，随后 卜降，2.5小时时接近基础水平。C-myc蛋白在静态时表达也非常低， 经剪切力作用后缓慢增加，C-myc蛋白水平明显较c-fos低，而且剪应力为4dyneslcm，和 1Odyneslcmz两种情况对C-myc蛋白表达的影响无明显差异。其高峰在1.5小时。随后在2.5 小时时接近基础水平。说明人脐静脉内皮细胞c-fos蛋白表达具有对剪切力人小和时间的依 赖性;c-myc蛋白表达具有时间依赖性。剪切力调节的原癌基因表达的增加在调节细胞增 生和分化方面几有重要意义。 关键词:剪切力 人脐静脉内皮细胞 C-fos蛋白 c-myc蛋自 血管中，内皮细胞位于最内层，暴露于血液流动产生的血流应力的作用下。内皮细胞 具有多种生理功能，其结构和功能的改变对血液流动性、血管张力及通透性调节方面都有 影响，严重时引发病变。血液流动产生的剪切力就是影响血管内皮细胞形态和功能的重要 因素之一。原癌基因是在细胞受刺激后短时间内由转录因子迅速调控表达，原癌基因有多 种:c-fos,。一。yc,c-jun,egr-1辱。细胞在受剪切力作用后可通过一定的信号转导途径使 c-fos蛋白和c-myc蛋白表达增加，而且，不同剪切力，即剪切力作用大小、持续时间不同， 对其表达的ifsii也不同。 RanjanandDiamondln曾研究指出了动脉水平剪应力 (25dyneslcmz)和低水平剪应力(4dyneslcm2)对c-fos表达的不同影响以及两种剪切力作用 卜与细胞未受剪切力作用时的差异，在我们的研究中首次采用了4dyneslcm，和」Odyneslcmz 的剪应力，发现了两种剪切力对c-fos表达的影响有与前人不同的规律及两种剪切力对c-fos 表达影响的差异性 同时，我们也首次研究了4dyneslcm=和1Odyneslcm2的剪应力对c-myc 蛋白表达的影响，井揭示其规律。研究的结果提示我们需要对细胞受刺激后引起原癌基因 表达增加的途径进行进一步探究，而且两种剪切力对c-fos表达的不同影响表明在体内血流 有变化，甚至变化不人就可引起原癌基因表达量的变化，这对于一些疾病的治疗提供了有 意义的线索。原癌基因在国际上越来越引起人们的关注，并且发现他们确实与人止常生理 功能的发挥和一些疾病的发展有密切的联系，这也是我们进行此研究的意义所在。 1材料和方法 (i)材料: . 国家白然科学拢金资助课题 (资助:北京市自然科学基金 资〔助号3982005)资助项目 .*联系人:曾衍钧 Tel.010 Fax.010e-mailyjzeng@bjpu.edu.cn % 胰酶，明胶，胎牛dIl清 ，ECGS，青霉素，链霉素，谷氨酞胺，肝素钠，C-FOS 免疫组织化学试剂盒，C-M丫C免疫组织化学试剂盒，TritorkX-100。 (ii)人脐静脉内皮细胞和培养: 取新鲜脐带 (产后6小时之内)， 中〔国人民解放军总医院妇产科提供)，将脐静脉用 PBS冲洗干净，注。.25%胰酶置370C水浴箱中消化，15-20分钟，收集消化液 1200r/min 离心lOmin，收集沉淀的细胞，植入铺有 I%明胶的培养皿中，加入M199培养液，培养 液中含25%胎牛血清，ECGSO-O1mgJmL青霉素200u1ml