耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制探析.docVIP

精品论文 参考文献 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制探析 海青山 (内蒙古呼伦贝市中蒙医院检验科 021000） 【中图分类号】R969 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）06-0421-01 【摘要】 目的 通过对菌株的检验来对鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药机制进行探讨。方法 在临床中要先对耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌进行分离，细菌鉴定采用法国梅里埃ATB半自动细菌鉴定仪，药敏选用KB纸片法与药敏上机板条相结合，三维试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR检验方法检测耐药基因，PCR阳性产物进行基因测序。结果 通过与基因库的比对可以发现，所选的6株鲍曼不动杆菌大多数是多重耐药菌株，在三维试验中，此类菌株均产生了ESBLs，有4株菌株产生了AmpC酶。在6株鲍曼不动杆菌的耐药基因型检测中发现有4株AmpC酶阳性，6株均为TEM阳性，4株为PER阳性，4株为OXA-24、VIM、IMP和VEB型等均为阴性，6株OXA-23型均阳性。结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌有OXA-23型碳青霉烯酶基因，OXA-23型碳青霉烯酶是主要耐药机制。 【关键词】 耐药基因型 OXA-23 型碳青霉烯酶 鲍曼不动杆菌 多重耐药菌株 由于细菌的耐药性不断提高，常规的抗菌药已不能对多重耐药菌株进行有效的抗感染治疗。这给临床的治疗带来了较大的困难[1]。鲍曼不动杆菌的耐药机制较为复杂，例如对修饰酶、B-内酰胺酶、膜孔蛋白缺损、外膜蛋白的丢失等机制的研究困难较多。本文主要选择我院2009年1月～2012年1月期间分离的62株确诊为鲍曼不动杆菌的细菌对其耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药机制进行检验。 1、材料与方法 1.1菌株来源 选择我院2009年1月～2012年1月期间分离的62株经半自动ATB细菌鉴定仪确诊为鲍曼不动杆菌的标本，其中有6株是对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌：200901151、201006202、、201012053、201110112、201201241。这6份菌株分别来源于ICU2份、呼吸科2份、脑外科1份、CCU1份。所有的菌株均通过半自动ATB微生物鉴定仪进行了鉴定。 1.2标准菌株 高产AmpC酶阴沟肠杆菌和TEM-26型大肠埃希菌与鲍曼不动的标准菌株及肺炎克雷伯菌ATCC700603和大肠埃希菌AT CC25922由本院实验室进行保存。原标准菌株均购自中国疾控CDC中心。 1.3主要仪器：上海艾测电子科技有限公司生产的PCR仪器、检测细菌的设备是法国梅里埃的半自动ATB、珠海TGL-16R高速冷冻离心机、海尔Dw-40L92型低温冰箱、济南鑫贝西BSC-1100ⅡB2型生物安全柜、上海博迅SPX-100B-Z型细菌培养箱、北京六一DYY11B型电泳仪。 1.4药敏检验 现有的检测细菌的设备是法国梅里埃的半自动ATB，试剂也是梅里埃的试剂，鉴定均为上机试剂板条。药敏为手工KB纸片法与上机板条相结合。手工纸片有：磺胺异恶唑为英国Oxoid公司产品，阿米卡星、头孢哌酮、庆大霉素、氧氟沙星、舒巴坦、甲氧苄啶、头孢呋辛、克拉维酸、头孢曲松、亚胺培南、头孢噻肟、环丙沙星、头孢他啶、头孢西丁、头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南等，这些均是为北京天坛药物生物技术开发公司的产品。 PCR 扩增试剂盒、染色体DNA 提取试剂、质粒碱裂解提取试剂均为上海申能博彩生物公司产品。琼脂选择的是杭州天和微生物试剂有限公司生产的产品。 1.5 PCR检验方法检测耐药基因 采用上海艾测电子科技有限公司生产的PCR 仪器来检验菌株中的耐药基因，采用蛋白酶K法和碱裂解法对其中的染色体基因和被测细菌质粒基因进行检测，耐药株选择采用primer 软件设计引物，并且参考GenBank提供的耐药基因，PCR的产物需要在含0.5mu;g/ml溴化乙锭的基础上，在1.5%的琼脂糖凝胶上进行电泳，之后在紫光灯下等待结果，最后在凝胶成像系统上进行成像处理。 1.6 三维试验检测ESBLs和AmpC酶 参照吴伟元［4］和Coudron［3］报告的酶提取物三维试验作部分修改进行检测。 2、结果 2.1药敏结果：通过与基因库的比对发现，所选的6株鲍曼不动杆菌大多数是多重耐药菌株。 2.2在三维试验中：此类菌株均产生了ESBLs，有4株菌株产生了AmpC酶。 2.3耐药基因检测：在6株鲍曼不动杆菌的耐药基因型检测中发现有4株AmpC酶阳性，6株均为TEM 阳性，4株为PER 阳性，4株为OXA-24、V