五 高血压的基因研究与基因治疗进展.ppt

四、高血压与缩血管基因的抑制 （一）降低基因表达的反义技术 反义技术是根据靶基因结构特点设计反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN ) 分子，导入靶细胞或机体后与DNA或mRNA分子杂合, 从而封闭或抑制特定基因的复制或转录，减少一些致高血压蛋白质的形成。 血管紧张素原( angiotensinogen, AGT) 是RAS 系统中的重要成员之一,参与血管紧张素的形成和高血压的产生。 2011 年Kmiura 等利用重组腺病毒作载体携带的AGT基因的ASODN, 试验中给予5d龄的(spontaneously hypertensive rats,SHR)大鼠一次心内注射该载体, 可延迟发生高血压91d, 治疗中收缩压可下降23mmHg, 且转染后ASODN 在肝、肾、心脏中稳定发挥作用, 明显降低肝脏中AGT水平, 减轻左室心肌肥厚。 1 .血管紧张素原反义基因疗法 2.Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体( AT ⅠR) 基因反义基因疗法 ATⅠR和血管紧张素Ⅱ结合, 产生强大的缩血管效应 Wang等用反转录病毒携带AT1R-ASODN转染细胞，在体外及SHR体内试验中均能明显降低AngII效用, 达到降低血压的目的。 3.血管紧张素转换酶反义基因疗法 血管紧张素转换酶(ACE) 能使无活性的血管紧张素Ⅰ末端裂解2个氨基酸, 形成强烈的收缩血管物质AngⅡ, 引起血压升高。 Wang等以逆转录病毒为载体将ACE-ASODN心内注射给5日龄的SHR, 结果发现, 产生的降压作用明显而持久, BP降低13-17mmHg, 并且能够减轻心室肥大, 阻断肾脏和血管内皮的病理性变化。 4.其他一些基因, 如酪氨酸羟基酶、β1肾上腺素能受体、血管紧张素基因活化素等基因的ASODN 也都是有降低血压作用。 （二）降低基因表达的RNA干扰技术 RNA 干扰( RNA interference, RNAi) , 是近年才发现的自然界进化上高度保守而普遍存在的一种现象, 是一种重要的转录后基因沉默机制。 在设计小干扰性RNA的靶位点时，应尽量选择对靶mRNA特异、而与其他内源性基因无同源性的核苷酸序列。 小干扰性RNA诱发的基因抑制具有高度的序列特异性。在小干扰性RNA上一个错配的碱基对即可使其失去原有的抑制基因表达的活性。换言之，只有与小干扰性RNA高度同源的mRNA才会被降解。这一特性在将RNA干扰技术用于治疗人类疾病时极为重要，为减少或避免抑制不相关基因奠定了基础。 Wang 等用针对肾上腺盐皮质激素受体(mineralcorticoid receptor, MR) 的重组子腺相关病毒携带短发夹小干扰RNA ( AAV. MR-shRNA) 来检测其对肾盐皮质激素受体的抑制和对冷诱导高血压( cold-induced hyper tension, CIH) 的控制能力。结果发现, AAV.MR-shRNA 治疗组CIH 大鼠在基因导入后3周内血压无增高，单剂量注射AAV.MR-shRNA 的大鼠其抗高血压作用至少维持3 周。 (三)降低基因表达的圈套技术 基本原理是:合成与顺式元件相一致的双链寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs),被称为圈套ODNs,转染入细胞,竞争性抑制反式因子转录因子)与顺式元件的结合,干扰转录因子的DNA结合活性及其后续基因的表达。 圈套策略示意图 在正常状态下，转录因子（TF）与顺式元件（Cis-E）结合， 导致靶基因的持续表达。 与顺式元件序列一致的圈套寡核苷酸（decoys ODNs）能结合 TF，阻止TF与Cis-E的相互作用，抑制靶基因的转录表达。 高 血 压 的 基 因 研 究与 基 因 治 疗 进 展 绿色包装与生物纳米技术实验室 高血压是一种以体循环动脉收缩压（SBP）和（或）舒张压（DBP）升高为特征的临床综合征，它是目前临床最常见、最重要的心血管疾病之一 。 第一节 高血压的基因研究 血压及高血压 血压的形成 血容量 血管张力 心输出量 高血压的形成 血容量过多 血管张力增加 心输出量上升 美国高血压预防、评价和治疗联合委员会第六次会议报告： 　 理想血压：120/80mmHg 正常血压：130/85mmHg 正常高限：130～139/85～89mmHg 高血压：≥140/90mmHg (18.7/12.0kPa) 高血压： 1级：收缩压140-159 mmHg 或舒张压90-99 mmHg