运用免疫亲和柱和高效液相色谱（HPLC）检测啤酒大麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇.pdfVIP

运用免疫亲和柱和高效液相色谱 (HPLC)检测啤酒 大麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇 王志萍 ，王德 良 ，冯作山 ，杨 静 ，王晓娟 ，陈 旭 1(新疆农业大学食品科学学院，新疆 乌鲁木齐，830052)2(中国食品发酵工业研究院酒类安全评价中心，北京 ，100027) 摘 要 采用免疫亲和柱净化、高效液相色谱定量等方法对啤酒大麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)进行检 测。向啤酒大麦中加入标准品，加标的范围在 0．1O～2．00 g／g，加标回收率为 92．04％--97．29％，相对标准偏 差是 0．92％～2．67 。检 出限是 0．01g／g。所测样 品中DON 的含量范围在 0．0123～0．0926 g／g，其 中江 浙、云南和东北产区的啤酒大麦中DON含量较高。 关键词 脱氧雪腐镰刀菌烯醇，高效液相色谱 ，啤酒大麦，免疫亲和柱 啤酒大麦易感染 的真菌毒素主要有脱氧雪腐镰 化 ，但是检测 出的毒素 中常含有一些其它衍生物 ，另 刀菌烯醇和赭 曲霉毒素 A等，脱氧雪腐镰刀菌烯 外复合抗原的制备有 困难 。气相色谱法具有快速 、灵 醇[1(Deoxynivalenol，DON)，化学名为 3a，7a，15一三 敏度高、准确等优点。但是需要衍生化 ，操作繁琐、重 羟基一12，13一环氧单端孢霉一9一烯一8一酮，是 四环的倍半 现性较差嘲。本实验用 DON免疫亲和柱进行净化 ， 萜 。DON分子式为 C H 。O ，分子量 296．3，又 叫呕 采用 HPLC的方法对 DON进行检测和定量 ，操作简 吐毒素 (Vomitoxin)，自然界中广泛存在于小麦、大 单 、灵敏度高、准确性和精确性好 。 麦、玉米等粮谷类农作物 中。可导致人的急性中毒 ， 症状是胃部不适、恶心、呕吐、头痛、头晕、腹痛 、腹泻 。 1 材料与方法 还有全身无力 、口干、流涎等症状，少数患者有发烧 、 1．1 实验材料 颜面潮红等症状，已被联合国粮农组织和世界卫生组 甲醇：HPLC级色谱纯 ；D0N标准品：美国SIG- 织确定为最危险的自然发生食 品污染物，其含量和危 MA公司，纯度 99 ；聚乙二醇 (PEG)：分子量 8000。 害性列入 国际控制研究 的优先地位 。欧盟委员会规 除特殊注 明外 ，所用试剂均为分析纯 ，水为超纯水 。 则 EC1881／20o6号规定 了谷物和谷物食品中DoN 1．2 主要仪器 的限量标准 。其 中未经加工谷物 的最大 限量为 1 PerkinElmer公司Series200高效液相色谱仪； 25O~g／kg，而经 过 粉碎 的粉 状 物 的最 大 限量为 ZORBAXSB—C18柱 (安捷伦 公司)；氮气 吹干仪 75O~g／kg，我国谷物中DON 的限量标准为 1000,／g／ KL512J(~京康林科技有限责任公司)；KQ一100DE kg。啤酒大麦是啤酒酿造 的主要原料 ，很容易感染 型医用数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有 限公 DON，制麦过程中，DON会影 响大麦发芽 ，使 啤酒大 司)；DON TestHPLC免疫亲和柱 (VICAM 公司)； 麦的发芽率低于 95 L2]，导致产生 的酶和浸出物减 微纤维滤纸 (VICAM 公司)。 少。DoN还可能导致啤酒 的喷涌 ，啤酒色泽 的改变 1．3 实验方法 或产生臭味等_3]。 1．3．1 采