葛根素与普伐他汀合用治疗兔心肌缺血再灌注损伤的实验研究.docVIP

精品论文 参考文献 葛根素与普伐他汀合用治疗兔心肌缺血再灌注损伤的实验研究 汪蕾1 陈红霞2(通讯作者) (1 湖北中医药大学检验学院 430065；2 咸宁学院医学院 437100) 【摘要】目的 观察葛根素与普伐他汀合用治疗新西兰兔心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法 采用暂时阻断兔冠状动脉的方法制备缺血/复灌注损伤模型。分为普伐他汀、葛根素以及普伐他汀与葛根素联用组。普伐他汀的给药方式为实验前3h灌胃，葛根素的给药方式为损伤后10min腹腔内注射。术后2h测量心肌梗死面积；检测动脉血乳酸脱氢酶和肌酸激酶浓度以及梗死区内皮型和诱导型一氧化氮合成酶活性。结果 葛根素与普伐他汀合用能显著减少心肌缺血再灌注后的心肌梗死面积，降低血乳酸脱氢酶和肌酸激酶浓度，增加梗死区内皮型一氧化氮合成酶以及内皮型与诱导型一氧化氮合成酶的比值，作用较单独使用葛根素或普伐他汀显著。结论 在使用普伐他汀的基础上，早期联合应用葛根素对新西兰兔的心肌缺血再灌注损伤有明显的治疗效果，优于二者单独应用。其机制可能与上调具有保护性作用的内皮型一氧化氮合成酶的合成有关。 【关键词】缺血再灌注 葛根素 普伐他汀 乳酸脱氢酶 肌酸激酶 一氧化氮合成酶 急性心梗发生后，通过溶栓疗法等措施能及时恢复心肌的血液灌注。但再灌注的心肌在短时间内会出现损伤加重的现象[1]。如何减轻再灌注引起的损伤一直是临床研究的热点。通过对发病机制的研究，发现心肌局部的内皮型一氧化氮合成酶 (endothelial nitric oxide synthase，eNOS)具有舒张血管、减轻炎症细胞浸润等作用，能减轻再灌注引起的损伤[2]。普伐他汀作为降脂类药，能诱导eNOS生成，提示能减轻再灌注损伤[3]，但是疗效有限。葛根素是传统的活血化瘀中药，在临床上用于改善组织的缺血状态[4]。联用以上两种药物是否具有协同效果值得研究。本研究以新西兰兔心肌缺血再灌注为实验模型，探讨联用普伐他汀和葛根素对再灌注损伤是否具有更好的疗效，并阐明其保护机制是否与诱导eNOS的合成有关。为中西药的联合预防性应用提供实验依据。 1 资料和方法 1.1主要实验材料及仪器 全自动凝胶图像处理系统(Pharmacia公司，Imagemaster VDS)，紫外分光光度计(日本Shimadzu公司，UV-2201)，iNOS和eNOS（A014-1、H195）、LDH(A020-2)、CK(A032)和CK-MB(H197）试剂盒购自南京建成生物工程研究所，普伐他汀由上海三共制药有限公司生产，葛根素注射液(2ml，100mg)为湖南康普制药有限公司产品。 1.2动物模型的制备及实验动物分组 健康雄性日本大耳白兔(体重2.5～3kg/只，咸宁医学院动物房提供）。以20%乌拉坦腹腔麻醉(3ml/kg)。暴露心脏后，切开心包显露出冠状动脉左室支，于左心耳下用缝线穿绕冠状动脉左前降支并放置硅胶管，夹闭冠状动脉左室支至室壁颜色变暗，动态观察心电图，ST段弓背上抬大于0.2mV，T波高耸。40min后放松结扎线，再灌注2h，直至ST段下降ge;1/2。 给药方式以及分组：普伐他汀于40deg;C生理盐水制成混悬液，在实验前3h时以10mg /kg灌胃；葛根素注射液以60mg/kg于再灌注后10min经腹腔注射；生理盐水灌胃以及腹腔注射量等同于干预组。分5组(n=7）：普伐他汀干预组、葛根素干预组和普伐他汀联合葛根素干预组(两种药联用组)；普伐他汀对照(生理盐水灌胃)组；葛根素干预对照(生理盐水腹腔注射)组；两种药联用对照(生理盐水灌胃以及腹腔注射)组。 1.3 心肌梗死范围的测量 实验结束后再次阻断冠状动脉血流，注射Evans Blue进行心肌染色，缺血区不能染成蓝色。左室心肌切成约2mm的薄片，将未染色的心肌分离后置于1%TTC磷酸缓冲液内，其中灰白色为坏死区，深红色为非坏死区。将两者分离后分别称重。以坏死区占左室质量的百分比表示梗死比率。 1.4 一氧化氮合成酶总活性以及诱导型和内皮型一氧化氮合成酶活性检测 取缺血区及对照组相应部位心肌组织200mg，制成组织匀浆并按照试剂盒说明测量和计算内皮型NOS(endothelial NOS，eNOS)和诱导型NOS(induced NOS，iNOS)的活性。 1.5 血液生物化学指标检测 所有动物均由颈动脉抽取动脉血1ml，400gtimes;10min，提取上清，检验乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase，LDH) 和肌酸激酶