血管紧张素II心肌细胞损伤作用.docVIP

精品论文 参考文献 血管紧张素II心肌细胞损伤作用 倪建毛1 王学群1 倪彩娥2 （1江西省鹰潭市中国人民解放军第184医院急诊科 354000） （2 江西贵溪化肥有限责任公司职工医院 335424） 【摘要】目的 观察血管紧张素II刺激心肌细胞后SOD值及细胞凋亡率、并且探讨其机制。方法 1、取SD乳鼠心肌细胞做原代培养，分为空白对照组、AngII刺激组（分为不同浓度组）；2、空白对照组不加任何刺激物。3、AngII组用浓度分别为40、60、80、100umol/L的AngII刺激乳鼠心肌细胞48小时；4、用化学比色法测定SOD活力，流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 AngII刺激乳鼠心肌细胞48小时后细胞凋亡明显、SOD活性降低，且不同浓度AngII组间差异显著（Plt;0.05）。结论 血管紧张素II可引起鼠心肌细胞损伤，并随浓度增加而加重。 【关键词】超氧化物歧化酶 血管紧张素II 心肌细胞 【中图分类号】R972 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）22-0027-02 心肌细胞的凋亡和坏死在急慢性心力衰竭过程中起了重要的作用，在心力衰竭情况下RAAS（renin-angiotensin-aldosterone system）系统激活，血管紧张素II(AngII)增加，在心肌肥厚及心力衰竭的发生、发展中起着重要的调控作用。本试验在体外乳鼠心肌细胞的原代培养基础上，通过观察血管紧张素II刺激下心肌细胞SOD活力、细胞凋亡，探讨AngII损伤心肌细胞可能的机制。 一、材料 （一）细胞来源：新生SD乳鼠心脏分离心肌细胞做原代培养，SD乳鼠由苏州大学动物房提供。 （二）试剂 DMEM培养基、血管紧张素II、二甲基亚砜、胰蛋白酶、EDTA，SOD检测试剂盒，Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒。 （三）仪器 BB-5060型CO2培养箱、IX70型倒置相差显微镜、SW-CJ-1F型净化工作台、LDZ5-2型高速离心机、ULT1386-V34型-80℃冰箱、MDF-U332型-20℃冰箱、HZ-9211K恒温震荡器、DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱、721分光光度计、XW-80A旋涡混匀器、流式细胞仪（型号：FACSVantageSE）。 二、方法 （一）SD乳鼠心肌细胞的提取、纯化和培养 采用无菌操作的方法取SD乳鼠心脏，用PBS缓冲液反复清洗，用眼科小剪刀剪成1-2m大小的块状，加入0.25％的胰蛋白酶Ⅱ消化液中，置37℃培养箱孵化5-10min，将上层液体转至DMEM液管中，1000r/min离心3-5min，去上清，用DMEM培养基重悬细胞，保存于37℃CO2培养箱。将未消化完的心肌组织块再加入消化液，重复上述步骤，直至所有心肌组织消化完毕为止。将所得的心肌细胞转至70ml的细胞培养瓶中，37℃ CO2培养箱培养60～90min，待成纤细胞贴壁后，吸取上层细胞悬液至新的培养瓶中，计数后按5times;105个/ml将细胞加至96胞培养板，置5％CO2和95％O2的培养箱37℃培养，同时观察和记录心肌细胞的生长状况。 （二）试验分组（96孔板中对照组和AngII组分四个浓度组分别取10孔） 1、对照组：仅用加入2％新生小牛血清的DMEM培养基。 2、AngII组：DMEM培养基中分别加入浓度为20、60、80、100umol/L的血管紧张素II作用48小时。每种处理10个复孔，置于37℃含5%CO2饱和水汽培养箱中培养。 （三）SOD、细胞凋亡率的测定 1、标本收集 细胞按上述不同刺激培养48小时后，吸取培养液上清，置于-20℃保存待测SOD；吸除培养板中培养基上清，剩余细胞收集后用于细胞凋亡率的测定。 2、SOD测定、细胞凋亡率均按照试剂盒说明书步骤进行。 三、数据处理 采用SPSS11.0统计软件进行分析，所有数据用均数plusmn;标准差表示，组间比较用方差分析，P＜0.05认为差异有统计学意义。 四、结果 Ang-II 刺激乳鼠心肌细胞48小时后，培养上清液中SOD浓度明显低于空白对照组( Plt;0.05)，且随AngII浓度加大SOD下降明显，不同浓度组间差异显著( Plt;0.05)（见表1）。各组细胞凋亡率明显高于空白对照组( Plt;0.05)，且随AngII浓度加大凋亡率升高明显，不同浓度组间差异显著( Plt;0.05)（见表2）