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基因工程制药Genetic engineering Pharmaceutical 生技1班 10号 陈晓萌 主要内容 基因工程制药概述。（了解） 基因工程药物的生产过程。（了解） 目的基因的获得。（掌握） （一）概述 基因工程制药的诞生？ 为什么会出现基因工程制药？ 基因工程药物类别？ 基因工程制药的概念？ 基因工程制药的发展方向？ 基因工程的诞生 世界上第一个重组DNA实验 1972年斯坦福大学化学家P.Berg借助内切酶和连接酶将猴病毒SV40的DNA和大肠杆菌λ噬菌体的DNA在试管中连接在了一起，第一次成功地实现了DNA的体外重组。 美国斯坦福大学生物化学系：Paul Berg教授 (1980年诺贝尔化学奖获得者) 第一个基因工程药物--人胰岛素 世界第一个基因工程药物的诞生：美国Lilly公司的重组胰岛素投放市场——1982 出现原因P14 化学合成药物 不能直达病灶，有时不可彻底治愈 内源性生理活性物质作为药物 材料来源困难 造价高 可能会产生排斥反应 提取过程中难免有病毒感染 …… 基因工程制药的发展方向 开发针对神经系统、肿瘤、心血管系统、艾滋病及免疫缺陷等重大疾病的多肽、蛋白质和核酸等新生物技术产品。此方面开发重点将主要是干扰素、生长激素与 T-PA（组织型纤溶酶原激活剂） 等。 选择一批市场前景好的生物技术产品及疫苗、诊断用单克隆抗体进行开发 （如乙肝基因疫苗与单克隆抗体诊断试剂） 主要内容 基因工程制药概述。（了解） 基因工程药物的生产过程。（了解） 目的基因的获得。（掌握） （二）基因工程药物生产的过程 获得目的基因 组建重组质粒 构建工程菌 （或细胞） 除菌过滤 产物分离纯化 培养工程菌 半成品检定 成品检定 包装 主要内容 基因工程制药概述。（了解） 基因工程药物的生产过程。（了解） 目的基因的获得。（掌握） （三）目的基因的获得 1.碱基序列未知 反转录法 反转录--PCR反应法 2.已知碱基序列 化学合成法 3.筛选基因的新方法 构建cDNA文库 编码序列富集法 旧基因的改造等 1.反转录法 提取，纯化mRNA (亲和层析法) cDNA第一链的合成 cDNA第二链的合成 （双链DNA--目的基因） 切除发夹结构 反转录--PCR法 mRNA经反转录合成cDNA第一条链后，直接在特异引物协助下，用PCR法进行大量扩增，从而特异合成目的基因，然后再用于重组，克隆。 PCR的原理及步骤 2.化学合成法 （1）目前常用的方法 磷酸二酯法、 磷酸三酯法、 亚磷酸三酯法、 固相合成法 自动化合成法、 ① 保护dNTP的5’端P 或3’端-OH ③ 用酸或碱的脱保护 ? 原理 磷酸二酯法 ② 带保护的单核苷酸连接 保证合成反应的定向进行。 带5’保护的单核苷酸与带3’保护的另一个单核苷酸以磷酸二酯键连接起来。