食品安全现代生物检测技术PPT.ppt

第六章 食品安全现代生物检测技术 第一节 免疫学检测技术 第二节 PCR检测技术 第三节 转基因食品的检测技术;第一节 免疫学检测技术 一、概述 抗原与抗体的结合反应是一切免疫测定技术的最基本原理。在此基础上结合一些生化或理化方法作为信号显示或放大系统即可建立免疫测定法，如放射免疫测定法、酶免疫测定法、荧光免疫测定法等。一个成功的免疫测定法必须具备3个要素：性能优良的抗体、灵敏和专一性的标记物和高效的分离手段。按照是否使用标记物分为标记免疫测定法和非标记免疫测定法，后者又称为经典免疫测定法；按反应介质分为均相或非均相(免疫复合物需分离后检测)免疫测定法；按反应状态分为平衡态或非平衡态免疫测定法。按照标记物种类，标记免疫测定法又分为放射性标记测定法和非放射性标记测定法。;目前最常用的免疫学检测技术如下： （1）放射免疫测定技术 （2）酶免疫测定技术 （3）荧光免疫测定技术 （4）发光免疫测定技术 （5）胶体金免疫测定技术;二、酶联免疫吸附试验(ELISA) （一）ELISA的基本原理 ELISA(Enzyme-Linked immunosorbent assay)的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。这一方法的基本原理如下。 （1）使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，井保持其免疫活性； （2）使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性．又保留酶的活性。 （二）ELISA的类型 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型。 1 双抗体夹心法测抗原 2 双抗原夹心法测抗体 3 间接法测抗体 4 竞争法测抗体 5 竞争法测抗原;（三）ELISA的材料与试剂 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；酶标记的抗原或抗体（结合物）；酶的底物；阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；结合物及标本的稀释液；洗涤液；酶反应终止液。 1 免疫吸附剂 2 结合物 3 酶的底物 4 洗涤液 5 酶反应终止液 6 阳性对照品和阴性对照品 7 参考标准品;（三）PCR反应参数 在PCR反应中每轮循环的各步反应时间不应过长，以免降低TaqDNA聚合酶的活性。下面介绍PCR反应中的一些具体参数。 1.变性 2.退火 3.延伸 4.循环次数 （四）常见的PCR种类 1.热启动PCR 2.一步单管PCR 3.多重PCR 4.依赖PCR的DNA指纹图谱技术 5.PCR-单链构想多态性分析 6.mRNA差异显示技术 7.随机引物扩增DNA多态性（RAPD） 8.以微卫星DNA介导的PCR技术 9.基因间重复性回文片段（REP）和基因内重复性一致序列（ERIC）的扩增 10.扩增片段长度多态性分析（AFLP） 11.限制性长度多态性分析（RFLP） 12.用于RNA病毒检测的核酸扩增技术;（五）PCR技术用于检测的主要步骤 （1）运用化学手段对目标DNA进行提取。 （2）设计并合成引物，引物设计或合成的好坏直接决定PCR扩增的成效。 （3）进行PCR扩增。 （4）克隆并筛选鉴定PCR产物，将扩增产物进行电泳、染色，在紫外光照射下可见扩增特异区段的DNA带．根据该带的不同即可鉴定不同的DNA。 （5）DNA序列分析;第三节 转基因食品的检测技术 一、概述 转基因食品又称遗传修饰食品（genetically modified food），简称GMF或GM食品。转基因食品大体上分为如下三类。 （1）转基因植物食品 由转基因植物如转基因的玉米、大豆、水稻、马铃薯、番茄、香蕉、苹果、菠菜等生产加工而成。 （2）转基因动物食品 如转基因的鱼、鸡、牛、羊等。目的主要通过导入外源基因或对自身基因加以修饰来使受体动物降低结缔组织交联度、改善肉质．或使受体生物个体肥大，或生产营养价值高的蛋、肉、乳等。 （3）转基因微生物食品 如转基因微生物发酵而制得的葡萄酒、啤酒、酱油等，此类食品是利用转基因微生物（如转基因酵母和酶）的作用而生产出来的食品。后两类转基因食品目前在市场上还很少。;（一）ELISA技术与转基因食品检测 l.ELISA基本原理 建立在抗体抗原免疫学反应的基础上。 ELISA分析法必须具备待检测的固定相抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体、酶作用的底物三种试剂，且满足两个前提条件： 待检测的抗原或抗体能够结合到不溶性载体表面并保持活性； 标记酶能与抗原或抗体结合并同样 保持各自生