第05章 体内药物分析.ppt

(三) 精密度与准确度 1）精密度 日内精密度（intra-day):同一天内，多次测量的精密度． 日间精密度 (inter-day)不同时间内测定结果的变异性． (三) 精密度与准确度 2）准确度 绝对回收率：≥５０%. 相对回收率: 又称方法回收率 (四) 灵敏度 1）检测限(LOD): S/N=3时的被测物的浓度. 2) 定量限(LOQ):能满足测定３－５个半衰期时样品中药物浓度或Ｃmax的1/10-1/20时的药物浓度． (五) 稳定性 1）短期室温条件下的稳定性考察 长期低温条件下的稳定性考察 冷冻－解冻（冻融）稳定性考察 　(六) 质量控制 　　ＱＣ样品穿插于实际样品测定全过程 （七）提取回收率 　　　 详细记录实验过程和结果 　　 　　　 （七）提取回收率 （4）．固相微萃取法（SPME ） SPME装置简单，类似于气相色谱微量注射器，其基本装置如图 1．压杆 2．简体 3．压杆卡持螺钉 4．Z形槽 5．简体视窗 6．调节针头长度的定位器7．拉伸弹簧 8．密封隔膜 9．注射针管 10．熔融石英纤维 11．熔融石英纤维 返回 (三)样品的分离与纯化 SPME操作方法 固相微萃取方法分为 萃取过程和解吸过程两步 ①萃取过程—具有吸附涂层的萃取纤维暴露在样品中进行萃取 ②解吸过程—将已完成萃取过程的萃取器针头插入气相色谱进样装置的气化室内，使萃取纤维暴露在高温载气中，并使萃取物不断地被解吸下来，进入后序的气相色谱分析 SPME的特点 ① 集采样、萃取、浓集、进样于一体， 避免引入多步操作误差 ② 无需萃取溶剂，样品量小、空白值小 ③ 萃取选择性高 ④ 纤维涂层（萃取头）可重复用上百次 ⑤ 适用于分析挥发性和非挥发性物质 ⑥ 与GC及HPLC、MS等联用，自动化分析 目前SPME使用的固相涂层种类限制了它的应用，但该法极具前途 (五）化学衍生化法 1）使样品中的药物转化成具有可被分离的性质 2）提高检测灵敏度 3）增强药物的稳定性 4）提高对光学异构体的分离能力 第二节 体内样品分析的前处理 第三节 体内样品分析方法与方法验证 一、体内药物分析方法 1.光谱分析法：比色法、紫外法、荧光和原子吸收分光光度法 2.色谱分析法：TLC、TLCS、GC、HPLC、HPCE 3.免疫分析法：IA 4.电化学分析法 灵敏度 专属性 光谱法 + + 刚开始应用较多，双波长，导数 色谱法 +++ +++ HPLC GC 免疫法 ++++ ++ 免疫交叉反应，重现性 二、分析方法的设计依据 1 待测药物的理化性质及体内存在状况 2 分析测定的目的与要求 3 生物样品的类型与预处理方法 4 实验室条件 三、分析方法建立的一般步骤 1 分析方法的选择 2 分析方法的建立 （1）检测条件的筛选 （2）分离条件的筛选 1 分析方法的选择 2 分析方法的建立 四、分析方法的验证 7）. 加热法 测定对热稳定性好的组分时，可采用加热的方法将一些热变性蛋白沉淀 加热温度视欲测组分的热稳定性而定，通常可加热到90℃；蛋白沉淀后可用离心或过滤除去 优点——方法最简单 缺点——只能除去热变性蛋白 (二) 缀合物的水解 尿中药物多呈缀合状态。一些含-OH，-COOH，-NH3，-SH的药物可与内源性物质葡萄糖酸或硫酸形成葡糖酸苷或硫酸缀合物。 1）酸水解 2）酶水解 　 第二节 体内样品分析的前处理 缀合物的水解方法 ① 酸水解——使用盐酸，该法比较简便、快速；与酶水解相比专一性较差、有些药物在水解中易分解 ② 酶水解——专一性较强、药物无分解；时间长、费用大，异性蛋白对于迂酸及受热不稳定的药物，可以采用酶水解法 酶水解常用酶： 葡糖苷酸酶（Glucuronidase） 硫酸酯酶（Sulfatase） 最常用的是葡萄糖苷酸酶与硫酸 酯酶的混合酶 水解条件： 溶液pH值4.5~5.5， 温度37℃培育数小时 缀合物的水解方法 ③ 溶剂解 缀合物（主要是硫酸酯）在萃取过程中可被加入的溶剂分解称作溶剂解 尿中的甾体硫酸脂在pH1时加醋酸乙酯提取，产生溶剂解 目前对缀合物的分析，逐渐趋向于直接测定缀合物的含量，体内以缀合物形式存在的药物的量，排出体外时，缀合物占所有排出药物总量的比率 例：血、尿中三唑仑代谢物的GC测定 酸水解： 尿中缀合物用盐酸水解时，使代谢物的七元环断裂、形成相应的二苯甲酮衍生物 酶水解： 用?-葡萄糖醛酸苷酶水解酶，尿液1ml、p