第五章诊断酶学PPT.ppt

(五)部分分析前因素对酶活性测定的干扰 1. 溶血 部分酶在红细胞膜或红细胞内的浓度远高于细胞外（如乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、己糖激酶等），少量血细胞的破坏就可能引起血清中酶明显升高。 2. 抗凝剂 草酸盐、柠檬酸盐和EDTA等抗凝剂为金属螯合剂，可抑制需Ca2+的AMY，也可抑制需Mg2+的CK和5’-NT； 草酸盐既可与丙酮酸或乳酸发生竞争性抑制，又能与LD及NADH或NAD+形成复合物，从而抑制催化的还原或氧化反应。 柠檬酸盐、草酸盐对CP、ChE均有抑制作用。 3. 标本储存温度 大部分酶在低温中可稳定较长时间，标本如在离体后不能及时测定，应及时分离血清或血浆并置冰箱冷藏。 酶 室温（25℃） 冷藏（0~4℃） 冰冻（-25℃） LD 1周 1~3d§ 1~3d§ ?-GT 2d 1周 1月 ALD 2d 2d 不稳定* ALT 2d 5d 不稳定* AST 3d 1周 1月 CK 1周 1周 1月 ChE 1周 1周 1周 ALP 2~3d 2~3d 1月 ACP 4h※ 3d# 3d# -NT 24h 1周 3月 AMY 1月 7月 2月 LPS 1周 3周 3周 LAP 1周 1周 1周 不同贮存温度时体液酶的稳定性（活性变化小于10%） *酶不耐融化；§与同工酶类型有关；※标本未酸化；#标本加枸橼酸或醋酸至pH 5 (六)酶活性浓度的单位 1.酶活性单位 （1）惯用单位 （2）国际单位 （3）Katal单位 1979年国际生化协会为了使酶活性单位与国际单位 制（SI）的反应速率相一致，推荐用Katal单位（也称催量，可简写为Kat）。即在规定条件下，每s时间内催化转化1摩尔底物的酶量，1katal=1mol·s-1。 我国法定计量单位制中的酶催化活性单位为katal，其对血清中酶量而言显然过大，故常用单位为μkatal或 nkatal。1katal=60×106U，1U=1μmol·min-1=16.67nmol·s-1=16.67nkatal。 2.酶活性浓度单位 临床上测定的不是酶的绝对量而是浓度。酶活性浓度以每单位体积所含的酶活性单位数表示。 （1）表示方法 目前在临床化学中，各国学者几乎都习惯用U/L来表示体液中酶催化浓度。1U/L=16.67nkatal/L。 （2）酶活性浓度单位的计算 用连续监测法进行酶活性测定时，不需作标准管或标准曲线，根据摩尔吸光系数很容易进行酶活性浓度的计算。摩尔吸光系数（ε）的定义为：在特定条件下，一定波长的光，光径为1.00cm时，通过所含吸光物质的浓度为1.00 mol/L时的吸光度。 如用连续监测法测定在线性范围内每分钟吸光度的变化（?A/min），以U/L表示酶活性浓度时，则可按下式进行计算： 式中：V—反应体系体积（ml） ε—摩尔吸光系数（cm2·mol-1） v—样品量（ml） L —比色杯光径（cm） △A—吸光度变化 106 —将mol换算成μmol 3.参考区间和正常上限倍数的应用 （1）参考区间 由于临床实验室进行酶学测定时所选仪器、试剂和方法不同，加之生物学变异等对酶活性影响，常常导致实验室之间所得参考区间差别甚远，应根据各自情况对各种酶建立自己的参考区间。表5-4列举了几种临床常用酶的成人参考区间。 （2）正常上限倍数的应用 正常上限倍数是指把酶测定值转换为正常上限值的倍数。在分析酶学报告时，除传统测定的报告方式（U/L）外，也提倡用正常上限（upper limits of normal, ULN）倍数作为酶活性浓度的表示法。 临床常用血清酶的测定方法与参考区间（37℃） *国际临床化学联合会（IFCC）参考方法； #实际为拟胆碱酯酶（PChE） 酶 方法 参考区间 ALT 连续监测法 底物中含磷酸吡哆醛 底物中不含磷酸吡哆醛 男：≤45U/L；女：≤34U/L* 5~40U/L AST 连续监测法 底物中含磷酸吡哆醛 底物中不含磷酸吡哆醛 男：≤35U/L；女：≤33U/L* 8~40U/L ALP 连续监测法（磷酸对硝基苯酚法） 1~12岁＜500U/L； 男：12~15岁＜750U/L， ＞25岁40~150U/L； 女：＞15岁40~150U/L ACP 比色法（磷酸麝香草酚法） 0.5~1.9U/L LD 连续监测法 L→P，即LD-L法 P→L，即LD-P法 ≤252U/L* 200~380U/L