大肠杆菌产l-苯丙氨酸发酵调控及代谢通量分析-生物通.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（３）：２５３４ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 大肠杆菌产 Ｌ苯丙氨酸发酵调控及代谢通量分析  袁佩佩　曹伟佳　王　震　张博文　陈可泉 　李　艳　欧阳平凯 （南京工业大学生物与制药工程学院　南京　２１０００９） 摘要　考察了外源添加中间代谢产物、维生素 Ｂ和硫酸镁对大肠杆菌发酵产 Ｌ苯丙氨酸的影 １ 响，结果表明，添加１ｇ／Ｌ柠檬酸三钠、１ｇ／Ｌ 酮戊二酸、１５０ｍｇ／Ｌ维生素Ｂ及３ｇ／Ｌ硫酸镁均对 α １ Ｌ苯丙氨酸的合成有利。根据构建的大肠杆菌合成Ｌ苯丙氨酸的生化反应网络，利用代谢通量 分析其原因。结果表明，这些物质的添加均可以调节Ｇ６Ｐ和ＰＥＰ节点处的代谢通量分布，为Ｌ苯 丙氨酸的合成提供更多的前体物质赤藓糖四磷酸（Ｅ４Ｐ）、磷酸烯醇式丙酮酸（ＰＥＰ）和还原力 ＮＡＤＰＨ。通过补料分批发酵实验得出，优化后菌体对总葡萄糖的消耗提高了２４．４９％，菌体终浓 度提高了２３．５０％，Ｌ苯丙氨酸的终浓度提高了６２．８７％，Ｌ苯丙氨酸的收率提高了３０．８８％，乙酸 的合成降低了５６．５１％。 关键词　中间代谢产物　维生素Ｂ　硫酸镁　Ｌ苯丙氨酸　代谢通量分析 １ 中图分类号　Ｑ３３１ 　　Ｌ苯丙氨酸是一种芳香族氨基酸，是人体内必需的 通过添加乙酸盐、生物素、泛酸盐等对 ＦＰ０９４菌株中由 八大氨基酸之一。Ｌ苯丙氨酸可以用作食品、饲料添加 磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸和草酰乙酸构成的“三角 ［１］ 区”进行扰动，定性分析了此扰动对赖氨酸合成所需前 剂及某些医药的中间体 。其中，Ｌ苯丙氨酸广泛应 ［２］ 提物代谢流量的调节机制，从而提高赖氨酸的产量。 用于甜味剂阿斯巴甜的合成 。Ｌ苯丙氨酸的生产方 ［１０］ ［３］ Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ等 的研究表明，添加ＴＣＡ循环中间产物 法主要有酶法和微生物发酵法 。由于酶的稳定性 差、酶和底物成本高，酶法在工业生产中的运用受到了 可以促进大肠杆菌ＫＯ１１的生长和乙醇的生成，提高了 ［４］ 乙醇得率和生产强度。 很大的限制 。微生物发酵法具有原料廉价易得、环 ［５］ 　　微生物发酵法制备 Ｌ苯丙氨酸的过程主要是将 境污染小、产物纯度高等特点 ，受到国内外研究者的 ＥＭＰ途径中得到的ＰＥＰ和ＨＭＰ途径得到的Ｅ４Ｐ经由 关注。近年来，为了提高Ｌ苯丙氨酸的产量和收率，人 莽草酸途径生成 Ｌ苯丙氨酸；该过程涉及的关键酶主 们大多专注于有关微生物发酵产Ｌ苯丙氨酸的发酵策 ［６］ ［７］ 要有己糖激酶、葡萄糖６磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、丙 略优化 以及产Ｌ苯丙氨酸菌株的基因工程改造 的 酮酸脱氢酶等；而中间代谢产物、维生素 Ｂ 和硫酸镁 研究。但是，基于代谢通量分析的微生物发酵产 Ｌ苯 １