高产大豆异黄酮β葡萄糖苷酶菌株的发酵工艺研究.pdf

高产火豆异黄酗p一葡萄檐尊酶菌株的发酵工艺研究 高产大豆异黄酮B．葡萄糖苷酶菌株的发酵工艺研究 研究生：徐春华 指导教师：谢明杰(教授) 专 业： 细胞生物学 研究方向： 微生物 111文摘要 从sp．R、sps、sp．39、sp．42、sp．oo、sp．d8、spR48年¨sp．90八株霉荫中， 选出了4种具宵较商GeJlistill酶活力的凶林，它们分别足叩．R、sp．42、8p．oo和sp．48- 利』n液体发酵的方法比较这四干叶·褥菌的产鹃活性，发现sp．R菌株产酶活力最高。sp．R 菌株产GenⅫn水解酶的最佳发酵条什为：2．5％的炭麸为碳源，4黝】l『{J硝酸钠为无机 氮i|Iji，o．5％的蛋n胨为有机氨源，王}}养基起始pIl7．0，瓶装体积为40mu250lnL。 按种擐lo％，培养％^度30℃，播瓶转数160rpm，培养时间84h。在此发酵条件下， sp．It菌株产酶活力为82u，n1L。 对人豆异黄酮的生理活性进行了研究。通过书l苯三酚Ej氧化法审J比色法测定 FenIoll反应产生的羟自山基的方法。对人豆异黄酮的抗氧化活性进行了比较研究。 通过MTT比色法，刘火Ⅱ异黄酮的抗舯瘤能力进行了研究。利j{j转基因酵母法对 大豆异黄喇的雌激豢活性进行了研究。结粜表明：酶解甙元，糖贰弛大豆异黄酮对 超氧臼山鼹的消除率达到50％酬所需要的川鬣IiiJIcs。分别为o．14 mg，nlL，o．32 1119，mL，对羟基自山基的消除率达到50％时所需要的刚齄即Ic50分j_；I】为0．57 mg，mL，0．63ml}，m【。。人豆异萸酮酶解甙元对大鼠肝癌7919细胞生艮抑制率达到 50％H十_ljIf需要的J{J量即lcⅫ为7．55mg，L，帮甙蜓大豆异黄酮对大鼠Ⅱ『癌7919细 胞生K抑制率达到50％时所需要的JfJ蜒即Ic，o为111．35mg，L。大豆异黄酮酶解甙元 I 的雌激索活。陡达到50％肘所需要的浓度即EC，o为o．3mg，L，糖峨型人豆异黄酮的 雌激素活性达到50％列所需要的浓J皇即Ecjf)为9．94m∥L。酶解甙元生理活性强于 棚成ffJ襄!i甙型人豆异黄倒。 美键词 人豆异黄喇 sp．k菌株发酵 酶解甙冗 生理活性 离产大豆异黄酮D一葡萄糖苷酶菌株的发酵工艺研究 第一毒文献综述 近年来刘人甄f|；|】^^及其功能性成分的圳究足毗羿笄l州利学家研究的热点，々家 预测．大蛙将址2l∽绷’n“维生素”。研究发现，火Ⅱ除』。4i奄小|iIlI醇，足优质篮n 质利汕脂的重蛭来源外，还禽有rI：多对人体健康柏‘益ffcJ贝订各种生理功能的生物活 性物质，它们足人露低聚袖、人甄磷腑、大Ⅱ并黄酮、人豆皂代羽l大豆活性肽等， 而也这嫂q：物洒性物质一h人n抟煎酮义凼其I蚍显的!L物学At住ql起社会幕f学术界 的杼遍天注。 人豆异黄酮受到，乏注始于1987年Akiyalna等的研究成果，他们发现人豆异黄 的体外抑制剂，1『|jPTK_；f1=细胞健订丝分裂信号转导过程巾起重要作，IJ，一旦生K因 子受体I，TK的活性受到抑制，就会影响促有丝分裂信号的转导，从而抑制细胞!L长 增殖，闪此Genisle．n¨j川1二抑制jl『|1瘤细胞的生故I“。1990年6月，荚囤国家癌症研 究院组织全荧著名学者研讨了火厄的抗癌效果，肯定了大豆异黄酮是鼹佳的天然抗 癌物质。…倚的研究表明，人豆异黄酮除了可防治山激索引起的相关癌痖外、还具 有泊疗心I衄管疾病、减缓殳J女更年期综合症、防治儡’质硫松疵等生理功能嘲。美国 是癌症多发病国家之一，近儿年平均以年43％的速度递增。为此美国政府和公众舆 论人肆宜传lJ乞人豆禽^^的好处，尤其足含有大豆异黄酮的食赫，把大豆异黄酮视为 珍品。捌统玑}_l豫囤外ilj场L禽订犬豆舁黄酮的保健食赭已选数十种之多。2002 年全球符种人豆异黄酮保健食品总销售额已达2．3亿美元。我囤对大豆异黄酮的研 究起步较晚，涉足人驻异黄酮产品口i产的多足从事天然产物研究和开发的企业，所 提供的