病理切片技术学术报告幻灯片稿.pptVIP

八、染色 染色就是利用染料在组织切片上给与颜色，使其与组织或细胞内的某种成分发生作用，经过透明后通过光谱吸收和折射，使其各种微细结构能显现不同颜色，这样在显微镜下就可显示出组织细胞的各种成分。染色剂与组织细胞相结合而使组织细胞着色的过程与物理和化学作用两者都有关系。 病理切片技术 目录 一、取材 二、固定 三、脱水 四、透明 五、浸蜡 六、包埋 七、切片 八、染色 一、取材 取材是制作切片程序中的首要步骤，取材不当，将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要，不能随意的切取组织来制作组织切片，否则病理检验的结果是不会令人满意的。 取材工具：取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦，以免损害组织造成人为组织变化，给诊断带来困难或导致错诊，漏诊。 标本的选取：应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病变与正常组织交界处。组织宜小不宜大，以不超过24x24mm2为佳，厚度以3—5mm为度，过大过厚会影响对标本的固定，另方面也影响切片的制作。特殊目的者应属例外。 二、固定 在组织病理学中，不管是组织切片乃至电镜还是大体标本的保存，都必须进行及时的适当的和有效的固定。组织只有经过固定，才能完成随后的一系列的制作，直至切片的最后完成。 1.固定的作用 固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是：保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构。 从免疫组化技术的角度，使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；保持组织的固有形态和结构；保持组织或细胞的抗原性。 2.固定的目的 能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。 保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖原等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。 使组织硬化，便于切块。 对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。 保存好大体标本。 可增强染色的作用。 3.固定的注意事项 组织固定越新鲜越好 组织固定，组织块不宜过大 对不同类型的组织应适当合理地选择固定液 组织固定，时间不宜太短，也不宜太长 固定液的量要充分 特殊病例或特殊物质应选择特殊的固定液 组织的第二次固定或后固定 4.固定液的使用 根据Bencroft的分类法，可分为四种类型： 醛类：甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。 氧化剂类：四氧化锇，高锰酸钾，重铬酸钾等。 蛋白变性类：甲醇，乙醇，醋酸等。 其他：氯化汞，苦味酸等。上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。 冲洗 组织经过固定后，脱水之前应进行冲洗，将组织内的固定液洗干净，否则残留组织内的固定液有碍制片和染色，而有些固定液则可在组织中继续起到脆化组织的作用，以至于损坏组织，给制片工作带来不利。在冲洗时，冲洗剂的选择应依固定液的种类和性质而有所不同。 冲洗时应注意以下事项： 水溶性的固定剂：需用流水冲洗。 酒精溶剂的固定剂：应用同浓度的酒精浸洗。 含苦味酸的固定剂：（苦味酸与甲醛混合液除外），须用70％酒精浸洗。 含有升汞固定剂：水或酒精中加碘以洗去组织内汞的沉淀。 含有铬酸的固定剂：冲洗时置于暗处，以免产生沉淀或使组织硬化而影响制片。 四、透明 目的是使石蜡渗透到组织中去，达到包埋的支持作用。 将组织投入可以同酒精又能同石蜡相混合的媒剂 中，组织中的酒精就被该媒剂取代，待酒精完全被该媒剂完全取代后，组织即成透明状态 透明后就可以将组织浸入溶解的石蜡进行浸蜡 透明剂 二甲苯：能与酒精，丙酮相混合，又是石蜡的溶剂。 对组织的收缩性强，作用迅速，组织在二 甲苯中时间不宜过长 。(常用) 氯 仿：作用缓和 ，不易呈现透明现象 香柏油：处理细柔组织的最佳透明剂 。 五、浸蜡 组织经媒剂的透明作用之后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂，这一程序就叫浸蜡。 石蜡的质量和熔度与切片质量密切相关 。 为了增加石蜡的韧性，可在石蜡中加入一些混合剂，常用蜂蜡，硬脂酸，松香等。 六、包埋 包埋，就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。 1.石蜡包埋法 包埋的方法有自动包埋机包埋和手工包埋两种。 手工包埋法： 1.组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。 2.准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒