C12 固相膜免疫测定(okK).pptVIP

Chpter 12　固相膜免疫测定 最大特点:简便、快速 不需要大型设备，对检测人员稍加 培训即能掌握操作要求和判定标准。 purpose Master：各类膜载体免疫测定的原理 be familiar：免疫金标技术 Know：概述(膜的种类与特性) 本章内容 小 结 固相膜免疫测定与ELISA相类似，其特点是以微孔膜作为固相。固相膜的特点在于其多孔性，像滤纸一样，固相膜可被液体穿过流出，液体也可以通过毛细管作用在膜上向前移行，利用这种性能建立了多种类型的快速检验方法。固相膜免疫测定包括了斑点金免疫渗滤试验、免疫层析试验、斑点ELISA 、酶联免疫斑点试验、免疫印迹法、放射免疫沉淀试验。 思考题 1. 叙述固相膜免疫测定概念。 2．膜的种类与特性是什么？ 3．膜载体免疫测定的种类有哪些？ 4．斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay, DIGFA)的原理是什么？ 5．免疫层析试验（immunochromatography assay, ICA）的原理是什么？ 思考题 6．斑点ELISA (dot enzyme linked immunosorbent assay, Dot-ELISA) 原理是什么？ 7．酶联免疫斑点试验(enzyme linked immunospot , ELISPOT) 原理是什么？ 8．免疫印迹法(immunoblotting test, IBT) 原理是什么？ 9．免疫印迹法(immunoblotting test, IBT) 注意事项是什么？ 10．放射免疫沉淀试验(radioimmunoprecipitation assay, RIPA) 原理是什么？ 　Section 1 概述 标记免疫测定 放射免疫测定 　 1960’ 酶免疫测定 　　 1970’ 荧光免疫测定 1980’－1990’ 化学发光免疫测定 1990’ 膜固相免疫测定 1990’ 免疫测定 固相免疫测定 B与F分离 固相膜的特点 多孔性 毛细管作用 非共价键高度吸附抗体或抗原 高度敏感性 易于漂洗 操作简便 常用的固相膜 玻璃纤维素(fiberglass)膜 尼龙(nylon)膜 聚偏氟乙稀( polyvinylidene fluoride ，PVDF)膜 硝酸纤维素（nitrocellulose，NC）膜 固相膜的技术要求 孔径：0.2~0.6 μm 流速：以ml/cm2/min表示 蛋白质结合力：吸附力很强，以μg/cm2表示 均一性 Sction 2　免疫金标记技术 以胶体金（ colloidal－ gold ）作为标记物，用于抗原抗体反应的一种新型标记免疫测定技术，是继荧光素、酶标记技术之后又一常用非放射性核素标记技术。 简便、快速，定性，“床边检验” 免疫胶体金标记原理 一、胶体金（colloidal gold）制备 方法：还原法 还原剂：柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。 柠檬酸盐还原法： 胶体金的制备及特性 胶体金（Colloidal Gold）15~60 nm 二、免疫金的制备 准备 结合 纯化 鉴定 保存 胶体金结合物（Conjugate） Section 3 膜载体免疫测定的种类与原理 IFA 穿流（FLOW THROUGH） ICA 横流（LATERAL FLOW） 膜固相免疫测定的特点 固相微孔膜测定种类 斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay, DIGFA) 免疫层析试验（immunochromatography assay, ICA） 斑点ELISA (dot enzyme linked immunosorbent assay, Dot-ELISA) 酶联免疫斑点试验(enzyme linked immunospot , ELISPOT) 免疫印迹法(immunoblotting test, IBT) 放射免疫沉淀试验(radioimmunoprecipitation assay, RIPA) 一、免疫渗滤测定 (IFA) 斑点金免疫渗滤技术（dot immunogold filtration assay，DIGFA (二)类型及操作1.双抗体夹心法测抗原 (二)类型及操作2.间接法测特异性抗体 (三)结果判断 二、免疫层析测定（ ICA ） 二、免疫层析测定（ ICA ） ICA 试剂条 （二）类型及操作 1.双抗体夹心法测抗原 （二）类型及操作 2.