[医学]2第二章 核酸的结构与功能09级临床医学.pptVIP

思考题 ⒈ 核酸的一级结构、DNA变性、核酸分子杂交。 ⒉ 核酸的紫外吸收性质。 ⒊ DNA双螺旋结构模型的要点。 ⒋ 真核生物内DNA的高级结构形式：核小体。 ⒌ 真核生物mRNA的结构特点。 ⒍ hnRNA与mRNA的关系。 ⒎ 相对富含稀有碱基的核酸：tRNA。 ⒏ DNA的Tm值与其所含的G+C比例的关系。 * mRNA结构特点 1. 大多数真核mRNA的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷，同时第一个核苷酸的C′2也是甲基化，形成帽子结构：m7GpppNm-。 2. 大多数真核mRNA的3′末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多聚A尾。 mRNA核内向胞质的转位 mRNA的稳定性维系 翻译起始的调控 帽子结构和多聚A尾的功能 三联体密码 不同的mRNA碱基组成和排列顺序都不同，但都只有A，G，C，U4种碱基。如果一个碱基就可以决定一个氨基酸，则只有四种变化方式，如果两个碱基决定一个氨基酸，则只有16种变化方式，都不能满足20种氨基酸的需要。1961年Crick和Brenner的实验得出了三个核苷酸编码一个氨基酸的结论，并将这种三位一体的核苷酸编码称做遗传密码(genetic code)或三联体密码。 二、转运RNA（tRNA）的结构与功能 功能：在蛋白质合成中，作为aa载体。 ? 结构特点： 1.含稀有碱基较多。 2.二级结构为“三叶草”型。 3.三级结构为“倒L”型。 三、核蛋白体RNA（rRNA）的结构与功能 与其它RNA不同，rRNA必须与蛋白质结合成核蛋白体（核糖体） (ribosome)才能发挥作用。 ?核蛋白体RNA(ribosomal RNA)是细胞内含量最多的RNA，约占RNA总量的80%以上，是蛋白质合成机器--核蛋白体(核糖体) 的组成成分。核糖体蛋白(ribosmal protein,rp)有数十种，大多是分子量不大的多肽类物质。 核蛋白体的大、小亚基 原核生物和真核生物的核蛋白体均由易于解聚的大、小亚基组成。分布在核蛋白体大亚基的蛋白称为rpl，在小亚基的称rps。 注意：蛋白质、核酸等的质量单位—S S是大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位，可反映分子量的大小。 原核生物核蛋白体 以大肠杆菌为例： 其核蛋白体总质量中三分之二是rNRA，三分之一是蛋白质。rRNA分为5S、16S、23S三种。 小亚基由16SrRNA和21种rps构成； 大亚基由5S、23s rRNA和31种 rpl构成。 真核生物核蛋白体 以小鼠肝细胞为例： 小亚基含18S rRNA和30多种rps； 大亚基含28S、5.8S、5S三种rRNA，近50种rpl。 各种生物核蛋白体小亚基中的rRNA具有相似的二级结构。 四、其他小分子RNA及RNA组学 除了三种常见RNA外，细胞中还存在着其它小分子RNA，统称为非mRNA小RNA（snmRNAs）。研究此的称为RNA组学。 核酶（ribozyme） 概念：某些RNA分子本身具有自我催化作用，可以完成核蛋白体的组装及rRNA的剪接等，起着类似于酶的作用，所以称核酶。（祥见第十二章） 由于这一发现不仅在研究基因表达中具有重大意义，而且在生命起源中有着开创性作用。为此Tom Cech和Sydney Altman荣获1989年Nobel化学奖。 核酶的推论与证明 无论在试管内或细胞内，大、小亚基都易于组成核蛋白体整体或分离成两部分。 几十种多肽是如何互相联结，又怎样与几种rRNA相连的呢? 用提纯了的亚基中所有的肽和rRNA在试管内混合，发现不需加入酶或ATP就可以自动组装成为有活性的亚基，也即说这种自我组装过程是以rRNA为主导的。 另外存在于真核细胞的细胞核内的 snRNA(small nuclear RNA)其功能是在hnRNA成熟转变为mRNA的过程中，参与RNA的剪接。 第四节 核酸的理化性质及其应用 一、核酸的一般理化性质 二、DNA变性 概念：在某些理化因素作用下，DNA分子互补碱基对之间的氢键断裂，使DNA双螺旋结构松散，变成单链，即为DNA变性。 最常见的因素---加热 增色效应 解链温度（融解温度Tm）：DNA内50%的双链被解开时的温度。 A-TG-C 解链曲线 例：变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 目 录 三、DNA的复性与分子杂交 复性和退火的概念： 变性DNA在适当条件下，两条互补链可重新恢复天然的双螺旋构象，这称为复性。如果此过程较为缓慢的逐渐进行，也称退火。 核酸分子杂交（hybridization） 概念：在核酸复性时，将不同核酸单链放在一起，只要它们有局部的互补，就可能结合形成局部双链，这称为核酸分子杂交。