第七章基因诊断与基因治疗原1学时现不讲.ppt

第 七 章 基因诊断与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy 第 一 节 基 因 诊 断Genetic Diagnosis 二、基因诊断常用技术方法 限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)分析 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide, ASO) 三、基因诊断的应用 遗传疾病 肿瘤 感染性疾病，传染性流行病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定 第 二 节  基 因 治 疗Gene Therapy * 目 录 * 目 录 基因变异致病类型 内源基因的变异 基因结构突变：突变在生殖细胞，引起遗传性疾病；突变在体细胞，导致肿瘤、心血管疾病等 基因表达异常：如原癌基因的表达引起癌症 外源基因的入侵: 如病原体基因侵入人体 特点 针对性强（以基因为检查材料和探察目标） 特异性强（分子杂交选用特定基因序列为探针） 灵敏度高（PCR和分子杂交具有放大效应） 适应性强（检测目标可为内源基因也可为外源基因） 一、基因诊断的概念和特点 定义 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 （一）核酸分子杂交技术 （二）聚合酶链反应 (PCR) （三）基因测序 （四）基因芯片 × MstⅡ酶切位点(GCTNAGG) 5′ 3′ 正常基因 5′ 3′ 突变基因 1.15kb 1.35kb 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 + ﹣ 0.2kb 1.15kb 1.35kb 正常人 突变携带着 患者 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 RFLP分析法 PCR/单链构象多态性分析 (single strand conformation polymorphism, SSCP) PCR产物变性后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，正常基因和变异基因的迁移位置不同，借此可分析确定致病基因的存在。 正常人 纯合突变 杂合突变 Leber 病患者 PCR/SSCP分析 + ﹣ 定义 早期是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。 目前广义上来讲是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的的方法。 一、基因治疗的概念 基因治疗的基本方法 （1）基因疫苗 主要指DNA疫苗，将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞内表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。 和常规的减毒活疫苗相比，DNA疫苗使前者由于病毒蛋白质所造成的毒副作用降低，而且易操作，易储存，且价格低。 基因治疗的基本方法 （2）基因矫正 (gene correction) 指将致病基因的异常碱基进行纠正，而正常部分予以保留。 （3）基因置换 (gene replacement) 用正常的基因通过体内基因同源重组，原位替换病变细胞的致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常状态。 基因治疗的基本方法 （4）基因增补 (gene augmentation) 将目的基因导入正常细胞或其它细胞，不去除异常基因，而是通过目的基因的非定点整合，使其表达产物补偿缺陷基因的功能或使原有的功能得以加强 基因治疗的基本方法 （5）基因失活 (gene inactivation) 一般指反义核酸技术，是将特定序列导入细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达，以达到治疗疾病的目的。 几种常见的基因失活技术 （1）反义RNA技术 反义RNA是指与 mRNA互补，且能抑制与疾病发生直接相关基因表达的 RNA。在mRNA水平上封锁现存基因的表达。 几种常见的基因失活技术 （2）核酶技术 通过核酶分子结合到靶RNA分子中适当的部位，催化对靶RNA分子的剪切，从而破坏靶RNA分子达到治疗疾病（如基因表达和病毒复制的抑制剂，或消除病毒基因组RNA）的目的。 几种常见的基因失活技术 （3）三链技术 脱氧寡核苷酸（三链DNA形成脱氧寡核苷酸）能与双螺旋双链DNA专一性结合，形成三链DNA，从而在转录或复制水平阻止基因转录或DNA复制。