(精编)【医学课件】 沉默NET-1基因对肝癌细胞生物学行为的影响教学课件.pptVIP

沉默NET-1基因 对肝癌细胞生物学行为的影响;肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma HCC）是全球性的健康问题之一。我们南通启东是WHO确定的HCC高发研究现场。 研究基于我们的首次发现NET-1在HCC组织中特定表达，并发现该基因参与HCC细胞的分裂增殖和癌发生、发展密切相关的细胞运动过程,探讨针对NET-1的siRNA抑制肝癌癌细胞株(SMMC-7721)中NET-1基因的表达，及该基因对癌细胞增殖、迁移、内吞的影响。 ;NET-1与NET-2到NET-7一起统称为NET-X，它们是由Serru等于2000年在EST 数据库中发现的7 个新的含4 次跨膜蛋白超家族( transmembrane 4 superfamily 或tetraspan family, 简称TM4SF) 的成员。 ;1、NET-1siRNA表达质粒和myc-NET-1重组表达质粒的构建 。 2、细胞培养与转染。 3、细胞内总RNA抽提及RT-QPCR检测NET-1m RNA。 4、Western blot检测NET-1蛋白表达。 5、CCK-8法检测细胞增殖活性。 6、流式细胞仪(FCN)检测各组细胞处于不同细胞周期中的比例与增殖指数。 7、细胞划痕试验检测细胞二围空间的迁移能力。 8、Transwell小室检测细胞三围空间的迁移能力。 9、Capture-ELISA方法测量细胞内生物素标记的转铁蛋白水平。 10、 anti-uPAR标记的癌细胞伪足形成实验。;;;;;;;8.干扰NET-1 可以抑制裸鼠HCC的生长;9.NET-1表达与HCC临床病理因素和预后的研究;（3）Cox比例风险模型多因素生存分析 ;;1.首次发现NET-1在肝脏良恶性组织中表达的特点。 2.在HCC细胞中干扰NET-1表达，抑制癌细胞的迁移、 侵袭、内吞和伪足形成的能力，并能抑制裸鼠HCC 生长。提示NET-1可能在HCC细胞运动中发挥作用， 是HCC细胞增殖相关蛋白。 3.NET-1表达与HCC临床病理因素密切相关，是显著影响患者预后的独立指标，高表达患者死亡风险增加，具有显著的临床预后评估价值。 4.已研制的NET-1多克隆抗体，可用于免疫组化、蛋白 印迹等多种实验，具有临床推广使用的可行性与价值。 ; ; Thank you ！