紫外分光光度法和荧光分析法幻灯片.pptVIP

一、紫外—可见光分光光度法 光谱分析法 二、荧光分析法 基本原理 仪器主要部件 主要应用 基本原理 概述：紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外-可见光区的特定波长或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。 范围： 可见光区（400~760nm） 紫外光区（200~400nm） Beer-Lambort 定律 *A为吸收度； *T为透光率； *E为吸收系数（以 表示，溶液浓度为1%（g/ml），厚度为1cm时的吸光度值） *c为溶液浓度； *l为样品总厚度。 适用条件： 入射光为单色光 溶液是稀溶液 固体、 液体和气体样品在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 仪器主要部件 单色器 光源 检测器 吸收池 信号显 示系统 光 源: 常采用氘灯和钨卤灯 钨灯最适宜的使用波长范围为320～1000nm。 　　 氘灯能发出光的波长范围一般为190～400nm 单色器：棱镜或光栅 吸收池：玻璃或石英吸收池 检测器：光电池、光电管、光电倍增管及二极管阵列检测器 仪器分类 单光束紫外可见分光光度计 准双光束紫外可见分光光度计 双光束紫外可见分光光度计 双波长紫外可见分光光度计 主要应用 利用药物与杂质对光的选择性吸收性质的差异，若药物在杂质的最大吸收波长处没有吸收，则可在此波长处测样品溶液的吸收度，通过控制样品溶液吸收度来控制杂质的量。 例：地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 二羟基蒽醌的三氯甲烷溶液 在432nm处有最大吸收，而 地蒽酚在该处几乎无吸收。 1、药物的杂质检查 2、药物的含量测定 如巴比妥类药物的含量测定（巴比妥类药物在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构）、芳酸及其脂类药物含量测定、维生素A含量测定（在325~328nm的波长范围内有最大吸收）等。 三点校正法 本方法是在三个波长处测得吸光度，根据校正公式计算吸光度校正值后，再计算含量。其原理主要基于以下两点： ①杂质的无关吸收再310~340nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸光度下降。 ②物质对光吸收呈加和性的原理，即在某一样品的吸收曲线上，各波长的吸光度是维生素A与杂质吸光度的代数和，因而吸收曲线也是二者吸收的叠加。 3、药物的鉴别 对比吸收光谱特征数据 对比吸收度（或吸收系数）的比值 对比吸收光谱的一致性 例 苯磺舒：用含盐酸的乙醇[取盐酸溶液（9-1000）2ml，加乙醇制成100ml]制成没1ml中含20ug的溶液，在225nm与249nm的波长处有最大吸收，在249nm波长处的吸收度为0.67 。 甾体激素类药物：丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20ug/ml），在239nm的波长处应有最大吸收，吸光度为0.57~0.60;在239nm与263nm波长处的吸光度比值应为2.25~2.45 1.判别物质的异构体，如互变异构体，顺反异构体，开链和成环异构体，旋光异构体，空间异构体等。反式异构体空间位阻小，共轭程度较完全。最大吸收峰波长，最大摩尔吸收系数，大于顺式。 2.推测物质的共轭体系和部分骨架 一般需与色谱，红外，质谱，波谱等多种仪器联合作物质的结构分析。 4.结构分析 紫外分光光度测定方法 普通测定分光光度法 1.单组分的测定 通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。 2.多组分的同时测定 ⑴若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。 ⑵若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。 Aλ1= εaλ1bca ＋ εbλ1bcb Aλ2= εaλ2bca ＋ εbλ2bcb 差示分光光度法 普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。 即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。 设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs cx)。则： Ax= εb cx As = εb cs ΔＡ＝Ａx －Ａs =εb(cx － cs ）=εbΔc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ。示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶液浓度cx