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人教版生物选修3 专题1 基因工程 复习问题 1.基因工程的“手术刀”是什么?来源，特点是什么? 限制酶 来源：主要从原核生物中分离 功能：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 切割后的DNA末端： 黏性末端和平末端 2.“分子缝合针”是什么？有哪几种？区别是？与DNA聚合酶作用的区别是？ DNA连接酶 E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶 ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键 3.“分子运输车”是什么？常用的是？其需要满足的条件是？其他例子？ 载体,具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 4.基因工程的四个步骤？ 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测和表达 5.获取目的基因的方法有哪几种？基因文库的类型？PCR的原理？条件（细化）？过程？ 从基因文库中获取 基因组文库和部分基因文库 利用PCR技术扩增目的基因：原理：DNA复制 条件：目的基因、引物、四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶 过程：变性-复性-延伸 第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 用化学方法直接人工合成：反转录法和人工合成 6.基因表达载体的组成包括？ 目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 7.目的基因导入植物细胞的方法？导入动物细胞的技术？受体？微生物细胞的特点？方法？ 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。 将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用 Ca2+ 处理细胞，使其成为感受态细胞 ，再将重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程8.目的基因检测的方法有哪几种？鉴定是什么水平的鉴定？包括哪些？ 1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。 2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用 用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。 3.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行抗原－抗体杂交。 4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。 9.植物基因工程的抗虫基因有哪些？抗病毒基因有？抗逆基因有？改良植物品质的基因有？ 抗虫基因：Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因；抗病毒基因：病毒外壳蛋白基因、病毒的复制酶基因；抗逆基因：渗透压调节基因、抗冻蛋白基因、抗除草剂基因；改良植物品质的基因：提高必需氨基酸含量的蛋白质编码的基因、控制番茄成熟的基因、与花青素代谢有关的基因 10.提高动物生长速度基因？乳腺生物反应器？工程菌？ 提高动物生长速度的基因：外源生长素基因。把药物蛋白基因+乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的受精卵中，将受精卵送入母体中，使其发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期，可以通过分泌的乳汁来生产所需的药品，成为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。工程菌：用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。 11.治疗遗传病的最有效手段是？定义是？类型有哪几种？ 基因治疗；指的是把健康的