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第七章 生物技术药物 细胞因子类药物 细胞因子：是人类或动物的各类细胞分泌的具有多样生物活性的因子。它们是一组可溶性的不均一的蛋白质分子，能调节细胞的生长与分化。P268 细胞因子的种类 干扰素（IFN） 白细胞介素（IL） 生长因子（GF） 集落刺激因子（CSF） 干扰素 干扰素是最早被发现的细胞因子，1957年，Isaacs等在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感干扰现象时发现，受病毒感染的细胞会产生一种细胞因子。这种细胞因子作用于其他细胞时能干扰感染病毒的复制，因而将其命名为干扰素。 至今发现多种天然干扰素，它们是一类由哺乳动物体细胞合成和分泌的多功能糖蛋白，具有抵抗病毒感染、抑制肿瘤细胞生长、调节机体免疫功能的作用。P279 生长因子 生长因子是一大类相对分子质量不大的可溶性多肽，因而又叫多肽生长因子，通过旁分泌、自分泌和内分泌等途径对靶细胞的增殖、运动、收缩、分化和组织改造起调控作用。 如表皮生长因子（EGF），神经生长因子（NGF）等 基因治疗与核酸治疗 基因治疗：是将外源基因导入目的细胞并有效表达，从而达到治疗疾病的目的。P311 RNAi：双链RNA导入细胞后可引起细胞内特定的mRNA降解，从而导致基因沉默，并使生物体产生相应的功能缺陷，这种由dsRNA介导的基因沉默称为RNA干扰。P324 单克隆抗体技术 骨髓瘤细胞与免疫淋巴细胞融合制备杂种细胞的过程称为杂交瘤技术。这种杂种细胞称为淋巴细胞杂交瘤。融合后的细胞混合物经分离、筛选和培养可得到仅分泌单一抗体的杂交瘤细胞集群，也克隆系。由一个淋巴细胞杂交瘤克隆系产生的抗体成为单克隆抗体（McAb） 。 杂交瘤细胞的制备过程 1 （1）细胞融合前准备 ①免疫方案 免疫细胞的制备一般要经过初次免疫、第二次免疫（向动物腹腔内注射抗体）、加强免疫（向动物静脉注射），然后选择合适的免疫方案进行细胞融合杂交，获得高质量的McAb。一般要在融合前2个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。如果还需要免疫脾细胞，一般取加强免疫3天后的脾脏，制成细胞悬液。 a、可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂有福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂。 b、颗粒性抗原免疫原性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。 杂交瘤细胞的制备过程 2 ②饲养细胞 加饲养细胞的主要目的在于可以分泌一些细胞生长因子，促进细胞生长和繁殖，同时还可以吞噬一些衰老的细胞和微生物。在制备单克隆抗体过程中，添加饲养细胞，对于杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养的过程是十分必要的。 ③骨髓瘤细胞 为提高杂交融合率，骨髓瘤细胞系和免疫动物应属于同一品系，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系的小鼠腹腔内产生大量McAb。 ④免疫脾细胞 免疫脾细胞指的是处于免疫状态的脾脏中B淋巴母细胞或浆母细胞。一般取最后一次加强 免疫3天以后的脾脏，制成细胞悬液，此时由于B淋巴母细胞比例大，融合的成功率较高。 杂交瘤细胞的制备过程 3 （2）细胞融合，选择杂交瘤 ①细胞融合过程 ②融合率，融合过程中许多因素（如PEG的毒性、细胞特性和操作过程等）都会影响细胞的融合，降低细胞融合率。 a、将50ng/mL秋水仙胺处理融合前的骨髓瘤细胞，使细胞周期发生一定的变化，有助于提高融合率。 b、PEG与二甲基亚砜（DMSO）联合用作融合剂，可提高融合率。 c、加入饲养细胞，释放生长因子，有助于促进杂交瘤细胞的生长，提高融合率。 ③融合剂 能使细胞融合的任何生物或化学试剂都称为融合剂。 a、化学融合可作为杂交瘤融合剂的化学试剂主要是聚乙二醇及其衍生物，或在结构上与PEG相似的化合物。 b、病毒融合，其融合机制主要靠病毒表面含有神经氨酸酶的一些突起的作用。 c、电细胞融合，包括非特异性和特异性电融合两种方法。 ④HAT选择杂交瘤 （3）抗体的检测 单克隆抗体技术 单克隆抗体的基本特性 单克隆抗体的基本特性是： 1、McAb为高纯度单一抗体，检测灵敏度极高； 2、可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受体； * *