9.4t离体磁共振频谱对间充质干细胞生物标识及成脂分化的研究 word格式.docxVIP

摘 要目的：利用 9.4T 离体型、高分辨率核磁共振频谱探寻人类来源于脐带华尔通胶间充质干 细胞代谢生物标识特征，同时定量分析间充质干细胞体外诱导成脂分化后代谢物的变化情 况。方法：培养收集第 4 代融合率约 80-85%间充质干细胞和人食道癌 EC109 细胞系（约 7-8×106，样品数分别为 n=6 和 n=2；原代细胞分别来源于汕头大学多学科中心和汕大医学 院病理实验室）。采用最终浓度为 1μM 地塞米松，5001μM 异丁基黄嘌呤，60μM 吲哚美 辛和 5μg/mL 胰岛素的 10% FBS/ LG-DMEM 培养基,对间充质干细胞进行 14 天成脂分化诱 导（样品数为 n=5）；使用油红 O 染色及 RT-PCR 验证成脂分化模型的成功。1H-MRS 数据采 集使用离体型 9.4T 高分辨率磁共振频谱仪（Bruker Avance 400MHz）。所获 取 频 谱 数 据 在 频率域经 XWINNMR（Bruker GmBH）软件初步处理后，再应用 Mestre-c 4.7 软件进行分析 。结果：获取的间充质干细胞谱线质量及重复性良好。间充质干细胞频谱中可见主要代谢 物包括：胆碱复合物、肌酸、谷氨酸、肌醇、醋酸、苏氨酸、甲硫氨酸以及脂肪酸（ 1.28ppm biomarker，被认为是神经干细胞特异性标识）。间充质干细胞成脂分化前后可见胆碱复合 物、肌酸、谷氨酸，醋酸代谢物均下降，而苏氨酸、甲硫氨酸及脂肪酸却呈上升趋势。定 量分析，总胆碱、醋酸、谷氨酸及肌酸分别由 6.3 ± 0.68, 0.97 ± 0.23, 0.3 ± 0.05and 0.1 ± 0.02 mM 下降至 1.1 ± 0.06 (p0.01), 0.45 ± 0.1 (p0.01), 0.16 ±0.08 mM (p0.05) 和未能检出水平；而甲硫氨酸、苏氨酸及 1.28 ppm 脂肪酸浓度从0.03 ± 0.01, 0.11 ± 0.02 和 (0.66±0.17)n mM 上升到 0.12 ± 0.05 (p0.01)and 0.15±0.05 (p0.05)和 (1.18±0.07)n mM(p0.01)（n 代表亚甲基数目）。成脂分 化 14 天后可见细胞变圆，包质内大量脂肪微滴形成，油红 O 染色脂肪微滴呈橘红色；同 时逆转录酶 PCR(RT-PCR)可见过氧化物酶体增生物激活受体-r( PPAR-r), 酰基辅酶 A 合 成酶（ACS）及脂蛋白脂肪酶（LPL）等基因表达明显增加。结论：离体型高分辨率磁共振频谱能获取间充质干细胞代谢特征；间充质干细胞同样含有被认为是神经干细胞特异性标识的 1.28 ppm biomarker，但它不是干细胞所特有的生物标识。根据代谢物变化特点，磁共振频谱能实现间充值干细胞成脂分化的监测和鉴定。关键词：磁共振频谱；间充质干细胞；成脂分化；生物学标识AbstractObjective: To study the biomarkers of the human mesenchymal stem cells (MSCs) isolated from umbilical cord Wharton’s Jelly and observe the variation of the biomarkers as quantitative analysis with adipogenic differentiation of MSCs by using in vitro 9.4T high resolution magnetic resonance (MR) spectroscopy.Methods: When the MSCs and the EC109 cell line grew up to 80-85% confluence at passage 4, they were collected (about 7-8×106, samples were n=6 and n=2; the primary cells were presented by Multidisciplinary Study Center and Pathology Laboratory of Shantou respectively). The MSCs were underwent adipogenic differentiation for 14days in the 10% FBS/ LG-DMEM culture medium with 1μM dexamethasone, 500μM 3-isobutyl-1-methylxanthine(IBMX), 60μM indom