药物检测常用色谱法.pptVIP

第三节 药物检测中常用色谱分析技术;色谱法;1)纸色谱和薄层色谱：比较简单的色谱方法;2).液相色谱：流动相为液体。; 3).气相色谱：流动相为气体（称为载气）。 ;薄层色谱（TLC） ; 1、薄层板的制备（5×20cm，10×20cm）;2、点样与展开 ;3、斑点定位 ;1、鉴别方法（或定性） ;（2）定量方法： ①挖掉斑点 → 溶剂萃取 → 过滤 → 蒸发溶剂 → 称量 ②薄层扫描仪：自动计算斑点面积：与已知量的对照品对照;三、应用;例1：头孢拉定、头孢氨苄等头孢类的鉴别 硅胶G薄层板 展开剂：0.1m枸橼酸/0.2M磷酸氢二钠/丙酮(60：40：1.5) 显色剂：0.1%的茚三酮溶液 规 定：供试品主斑点应与 对主斑点一致 样品 对照品;四、注意事项; ;二、高效液相色谱仪;;;1）高压输液系统：高压泵等 2）进样器：六通进样阀（手 动）、自动进样器 3）色谱柱：（心脏） 4）检测器：常用紫外检测器 5 ）数据处理系统;;2.主要部件;梯度洗脱装置;(2) 进样装置;(3) 高效分离柱;(4) 检测器;三、 高效液相色谱法的主要分离类型（根据色谱柱填充剂不同）;四、高效液相色谱工作流程;五、测定方法（实验课讲）;气相色谱法（GC）;气相色谱法（GC）;; 二、气相色谱检测器的类型;三、气相色谱工作流程;四、HPLC与GC的区别;t;（2）保留时间tR：从进样到组分色谱峰顶点的时间 （3）峰高h：从最高点到基线的距离。 峰面积：色谱峰与峰底（或基线）所围成的面积 ;（4）峰宽W：拐点作切线在基线上的载距。W越窄柱效高。 （5）半峰宽Wh/2点：峰高一半处的峰宽。;六、色谱的应用（定性、定量、杂质检查）; （1）计算： （2）规定：所测理论塔板数度不低于药典中该品种规定。 （3）改善方法：改变柱长，改变固定相、柱填充均匀、柱温等。 ;B、分离度：;C、重复性 取对照品溶液连续进样五次，其峰面积RSD≤2.0%;六、色谱法的应用;六、色谱的应用 3、在鉴别中的应用：（利用保留时间）;（1）外标法 （2）内标法 （3）面积归一化法（只测杂质） （4）主成份自身对照法（只测杂质） （加或不加校正因子）;（1）外标法：;（2）内标法：;AR：对照品峰面积 AS：内标??面积 CR：对照品浓度 CS：内标浓度;第二步：再用待测物（未知CX）和内标（已知CS） 混样进入仪器代入上公式：;（3）面积归一化法（杂质） 杂质峰占所有峰总面积中比例不超过一定数值来限量。 杂质含量=（杂质峰面积/总峰面积） 100%;（4）主成份自身对照法（杂质） 1）不加校正因子 无杂质对照品，以供试品稀溶液为限量对照溶液，比较杂质峰与对照液中的主峰面积，粗略计算杂质的限量。; ;2）加校正因子（有对照品） 待测液各杂质峰分别乘上校正因子后与对照品主成份峰面积比较，分别计算各杂质含量。 a、测定校正因子;即