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非洛地平杂质I方法学验证 测定仪器及检测条件 仪器:Waters 515泵 2487紫外检测器 7725i手动进样器 N2000工作站 测定条件 柱: AlltimaTM C18 5u Serial No.2009050187 规格250*4.6mm 流速：1~1.2ml/min 柱温：室温 检测波长：238 流动相：乙腈：甲醇：0.05mol/L磷酸二氢钾 500：270：330 2．非洛地平杂质I纯度检查 精密称取杂质I25mg至50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，配成0.5mg/ml的供试品溶液。 对照溶液配制 精密吸取供试品溶液1ml到100ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，配成1%的对照溶液。 系统适用性试验 取对照溶液连续进样5次.A平均=155022 RSD=0.71% n=9114 供试品溶液进样1次，所有杂质峰面积之和与对照溶液之比，按外标法计算，杂质I纯度为99.0%。 3分离度试验 精密称取非洛地平50mg到100ml容量瓶中，同时吸取供试品溶液0.3ml（1.5mg）到同一容量瓶中，用流动相溶解并稀释到刻度，在测定条件下进样，杂质I与非洛地平的分离度为2.3。 4．最低检测限试验 称取杂质I10mg到100ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释到刻度，再吸取该溶液100ul到100ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，配成0.1ug/ml的溶液，在信噪比大于3的条件下进样1次，吸取0.1ug/ml溶液1ml加2ml流动相混匀，配成0.033ug/ml的溶液，在信噪比大于3的条件下进样1次再吸取吸取0.1ug/ml溶液1ml加4ml流动相混匀配成0.02ug/ml的溶液，在信噪比大于3的条件下进样1次，测得最低检测浓度0.02ug/ml。 5．线性关系测定 标准溶液配置 精密称取供试品杂质I15mg到100ml 容量瓶中，用流动相溶解并稀释到刻度，吸取10ml到100ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，配成标准储备液，分别吸取储备液1ml，2ml，5ml，10ml，20ml到50ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，配成1~5号0.3mg/ml，0.6 mg/ml，1.5 mg/ml，3.0 mg/ml，6.0 mg/ml的标准溶液。在测定条件下分别进样1次，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标测定线性关系。 杂质I线性关系 浓度ug/ml 峰面积 回归方程 相关系数 0．3 9422 Y=30890X+1678.7 R=0.99988 0．6 21375 1．5 49006 3．0 93664 6．0 187074 从上述结果可以看出：杂质I在浓度0.3ug/ml~6.0ug/ml之间，线性关系良好，相关系数均大于0.9995。 6．回收率实验 精密称取供试品（批约180mg，置10ml容量瓶中，平行称取10份，其中一份用流动相溶解并稀释到刻度做为空白溶液，另9份每3份为1组，分别用线性项下的1号，3号，5号标准溶液溶解，将上述溶液高速离心20min，取上清液进样分析，取线性项下3号标准溶液（1.5mg/ml）连续进样5次，A平均=48687，RSD=0.65%，将空白溶液进样2次，杂质I A平均=4541，将另外9份样品分别进样1次，所得的杂质I的峰面积均减去空白溶液中杂质I峰面积4541，与标准溶液对比按外标法计算回收率。 结果归纳如下： 杂质I 次数 加入浓度ug/ml 峰面积 测定浓度ug/ml 回收率 % 平均回收 % RSD% St% 1 0.3 9491 0.292 97.5 99.9 2.5 2.47 2 0.3 9606 0.296 98.7 3 0.3 10186 0.314 104.6 4 1.5 48363 1.490 99.3 5 1.5 49523 1.526 101.7 6 1.5 49494 1.525 101.7 7 6.0 187819 5.787 96.4 8 6.0 193195 5.952 99.2 9 6.0 194580 5.995 99.9 20090102批号 0.399 0.426 0.417 总杂质 % 加速1个月 0.080 0.091 0.081 依拉普利拉 % 0.118 0.124 0.122 依拉普利双酮 % 0.422 0.389 0.4140 总杂质 % 加速2个月 0.079 0.079 0.08 依拉普利拉 % 0.121 0.121 0.124 依拉普利双酮 % 0.398 0.403 0.425 总杂质 % 加速3个月 0.076 0.076