产高温蛋白酶微生物菌种资源的研究.docVIP

产高温蛋白酶微生物菌种资源的研究 第l7卷 I997年 第3期 9月 微生物学杂志 JOURNALOFMICROBIOLOGY \(s) Vo1.17No.3 Sept.1硼Z ? 研究报告? 产高温蛋白I酶微生物菌种资源的研究’ . 鍪擎荣(武阪大学生命科学学院蝎0叽2),, 摘要对嗜温及嗜热微生物在不同环境中的分布豇其产蛋白的情况进行了{胃 关键词高温蛋-白酵;微生物资糠 L—I_—’——-—_-’’.’一 ● 高温自酶曲越辱蘑趣i啭热牲厦其 对有机溶剂,去污剂和变性荆较强的抗 性,在食品医药一’制革等诸多靠面具有 广泛用途此外,对商混鬣白蔼耐热机制 的阐明将为提高具有重要商业价值的工l_业 用酶的稳定性提供理论依据,区此,A们 十分重视高温置自尊的研究. 无论是对高温蛋白酶∞理论研究还是 开发其应用功能,首要条件是获褥高温蛋 白酶的高产菌株.一船面青鬣髓.瀚热 稳定性与产酶藕株螅毫.长温瘴星正相关 性.因此,.为了莸得擗高热稽定性的南盟 强自酶,就痖从嗜拇细蔺宙筛选产蓐菌 株.l研究藏昵l水生嗜热菌tz’船”qs aquatfc),嗜热解朊芽孢杆菌(Bacillus thermoprotP0lyticus)及嗜热脂肪芽孢 端 究和应用榆值的宝贵营种资源产高强蛋 白酶的嗜热细蔺悬藻书精广类暑用有效 的方法分离嗜热细菌弗充分利甩这些菌种 资源无疑具有重要意义. 我们.扶高温及非高温环境中采集样 品,从中分离嗜热细菌,并通过进一步筛 选获得了高温蛋白酶酶高产菌株. 1材料与方法 1.1培养基- 1.1.1蜘择培豢基,.鬻一自豫l,葡萄 精0.b聩霹胄p.,W口clq.一瞬ol2,KHPO0,05, 这些环境中蕴藏着大量的具有重要理论研MgSO.?7HO0.O01,FeSOO.OOOl, 憧稿日期:l997m一29 『1三者简夼:戴玄31岁,硕士,I993年业于武汉大学生命学学院,班为重庆市瞳高等师范专校西师 *匡家教委重点资功课冠 微生物学杂志第l7卷 pH7.2. 1.1.4F8培养基(%)蛋白胨0.2,葡萄 糖0.2,(NH.)2SO,CaCO30.2,FeSO’ 0.05,gsO.?7I-[~Ooo2,K~HPO’D.2, KH2PO,-7H2Oo.o5,pH7.0. 1.1.5FI2培养基(%)玉米粉4, Na2HPO4O.4,KH2PO’?7H2OO.O3, pHg,09.3. ●’ 1.2细誓的分离和计数 采用梯度稀释平板计数法进行分离计 数,将不同来源的样品进行十倍梯度稀 释,在PYS平板上豫布,将涂希后的PYS 平板分别置于28和55条件卞进行培 养,48h后分别计数嗜温细菌和暗热细菌. 1.3产蛋白一■热蠲誓曲符选 1.3.1初筛挑取PYS平板上的嗜热细 菌单菌落,分别接种于选择培养基平板, 于55条件下培养48h,凡菌落周围产生 透明圈者为产蛋白酶菌株. 1.3.2复筛将初舜得到的产酶菌株分 别接种于装有50m1各种复筛培养基的三 角摇瓶(250m1),于55(20’rpm)培 养36h后离心取上清液测定蛋白酶活力. f.4蛋白一活力爵定.- 将酶液样品以燕馏水适当稀释后,’取 200~1加入1已预先保温一于’60的装有 20l2%酪蛋白浩液的小离心管中,于 6O水浴保漏10rain,迅速加入Bo叽D.4 Molz氯乙酸终止反应,于室温静置 15mln,离心后取上清液500~1置于试管 中,加入25D舢lOMotNa:CO.溶液及 勘0l福林酚工作液,混匀后于40保温 30mln,测定680nm吸光度.对照在加入 酶液之前加入三氯乙酸,其余条件皆相 同.在上述条件下,将每分钟水解酪蛋白 ‘释放lg酪氨酸的酶量定为一个蛋白酶活 力单位.’ 2结果与分析 2.1罪■疆环瑰中的●热细■ 2.1.1土壤中的嗜热如菌采用梯度稀 释平板计数法,对常温土样中的嘻热细 菌,嗜温细菌的数量及产蛋白酶嗜热细菌 所占比例做了考查.由衷1可见,常温样 品中存在大量的嗜热细菌,在气温为5～ l4时可达2.4×1O’+/g土榉,与嗜温菌 可达哇1.2%o躇热l细蔼的数量与日照 强度及气温有关,日照强度大,气温高时 噌热细菌的数量也较多.土样中嘈热细菌 产蛋白酶菌株的比饼高这30呖. 2.1.2拳样中的嗜l熟蜂菌厨样采取上 述方法对非高温环永榉中盼增热l细菌进 行.考聋.由袭2可见,承样中也存在有 氧1温土样申嗜热蛔茵数量琨产蛋白晦葛抹所占比侧 WF1～武汉大学生物系实验地±样 ‘Th/M,,t咭热细菌/嗜温细菌数.以下同. 第3期戴玄等:产高温蛋白酶微生物菌种资源的研究27 wA1～武汉大学生物系实验地边承掏水样;DAI~3:武汉市末湖水样 嗜热细菌,即使在冬季(～2～3)低温 条件下也能从水体中分离到嗜热细菌,值 得注意的是,水样