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关于神经营养素┐3 重组腺病毒促进脊髓背根神经节的存活 作者：朱锦宇，朱庆生，黄耀添，杨浩，李顺利 【关键词】神经营养素 关键词: 神经营养素;背根神经节;腺病毒;基因治疗 摘 要:目的观察神经营养素-3 （neurotrophin3，NT-3）重组腺病毒 （adenovirus vector for NT-3，Ad-NT-3）对脊髓背根神经节（dorsal root ganglia，DRG）细胞存活的促进作用. 方法 原代培养DRG，加入不同感染增殖 率（multiplicity of infection，MOI）的Ad-NT-3，观察DRG 细胞的形态， MTT 法测定DRG 细胞的增殖活性. 结果 当加入MOI 为10 和50 的Ad-NT-3 时， 形态学观察发现，DRG 细胞数目增加，突起变长，尤其以3d 后表现更为明 显;DRG细胞的增殖活性显著增加（P0.01）.当MOI 为100 时1d 和3d，DRG 细 胞数目明显减少，无突起或变短，部分细胞死亡;MTT法测定DRG 细胞的增殖活 性均显著降低（P0.01）. 结论 NT-3 基因能通过腺病毒介导表达NT-3 蛋白， 促进体外培养DRG 细胞的存活. Keywords:neurotrophin;dorsal root ganglia;adenoviridae;gene therapy Abstract:AIM To investigate the effect of promoting sur-vival of adenovirus vector for neurotrophin3 （NT-3）（Ad-NT-3）on dorsal root ganglia （DRG）.METHODS Primary culture of DRG cells was established.To the experimental groups Ad-NT-3were added in different multiplicity of infec-tion （MOI）respectively.Groups added with culture medium served as control.The morphology and MTT test of the DRG cells were detected.RESULTS When the MOI was between10and50，the amount and MTT test of DRG cells increased significantly and the neurite became longer.When the MOI was higher in100，the amount and MTT test of DRG cells decreased significantly and the neurite became shorter.The DRG cells grew normally in control groups.CONCLUSION Ad- NT-3can promote survival of the DRG neuron in vitro. 0 引言 周围神经损伤后相应中枢神经元会发生退变坏死，失神经支配的靶器官也 会感觉缺失、肌肉萎缩.即神经损伤是损伤局部、神经元、靶器官三个水平的病 变［1］ .而中枢神经元的存活是周围神经再生的基础和先决条件.研究证明， 新生大鼠轴突切断引起大量运动神经元死亡，使用睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor，CNTF）、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）或胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neu-rotrophic factor，GDNF）能阻止该过程［2，3］ .本实验 采用原代培养大鼠的DRG 细胞，然后加入不同MOI 的Ad-NT-3，观察DRG 细胞 的形态，MTT 法测定DRG 细胞的增殖活性，以明确Ad-NT-3 对体外培养DRG 细 胞存活的促进作用. 1 材料和方法 1.1 材料 Ad-NT-3 和复制缺陷性重组腺病毒载体包装细胞系293 细胞（人胚肾细胞 系）由西安国际分子医学研究中心惠赠;D/F12干粉培养基、N1、胰蛋白酶购自 Sigma 公司;DMEM、胰蛋白酶抑制