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幽门螺杆菌毒素有关基因的克隆、测序及表达 论文类别：医药学 - 医学 上传时间：2012/9/11 11:45:00 论文作者：未知 论文网： 作者：韩锋产 闫小君 苏成芝 【关键词】螺杆菌幽门细胞 关键词: 螺杆菌幽门细胞;毒素相关基因;基因克隆;基因表达;温度诱导 摘 要:目的分段扩增、克隆幽门螺杆菌毒素相关基因cagA 中间区cag1， cag2，并利用大肠杆菌系统表达. 方法 PCR 法扩增cagA 基因，双脱氧中止法 测序正确后，克隆入大肠杆菌表达载体pBV220，受控于PR P L 启动子，转化 大肠杆菌DH5α ，42℃进行温度诱导. 结果 PCR 分段扩增出cagA 中间区基因 cag1，cag2，分别为975，755bp，克隆入pUC19 质粒，测序正确;在pBV 中构 建cag1，cag2 的重组表达载体pBVcagA1，pBVcagA2，工程菌诱导后SDS 显示新生表达蛋白带，Mr :Cag136 ×103 ，Cag227.9×103 ，均与预期的cagA 蛋白Mr 一致，约占菌体总蛋白的36%和24%. 结论 成功克隆分段扩增的cagA 中间区基因，并可在大肠杆菌DH5α 中高效表达. Keywords:Helicobacter pylori;cytotoxin-associated gene （cagA）;gene cloning;gene expression;temper-ature induce Abstract:AIM To amplify and clone the middle region of Helicobacter pylori cagA gene，and express the proteins in E.coli.METHODS After the cag1and cag2were amplified by PCR and sequencd by dideoxy methods，they were insert-ed into expression vector pBV220in which exogenous gene was controlled by PR PL promoters.The recombinant plasmids pBVcag1and pBVcag2were transformed into E.coli DH5α and induced at42℃respectively to express the encoded pro┐teins.RESULTS The middle region of cagA was amplified and975，755bp products were got as cag1，cag2，which were cloned into pUC19and sequenced correctly.Then，their recombination expression clones pBVcagA1and pBVcagA2were constructed.When their engineered bactera were in-duced，the anticipated Mr 36×10 3 and27.9×103 proteins band appeared on SDSgel and amounted to36%and24%of total bacterial protein respectively.CONCLUSION The H.pylori cagA middle region might be successfully cloned and efficiently expressed fractionally in E.coli. 0 引言 毒素相关基因A （cytotoxin-associated gene，cagA）基因是cag 致病岛 的一部分，其OFR 约3542bp 左右，3’端存在变异，相应蛋白Mr 为（1.28～ 1.40）×105 ［1］ ，是胃内致病微生物幽门螺杆菌（Hp）主要的毒力因子之一， 参与胃、十二指肠溃疡及胃癌等的发病，并与疾病的转归有关［2-4］ .中国 Hp 感染率高达80%以上，且大多为cagA+ Hp 的感染［5］ .现在一些Hp 标准菌 株的cagA 基因已克隆［6，7］ ，其表达产物cagA 具有较强的抗原性，其滴度 可反应Hp 株间的毒力差异，而且和疾病发展也有