第六章 生化药物.pptVIP

药物活性与分子构象相关，生物活性易失活，在分离纯化中易被破坏。酶、蛋白、核酸都有复杂的空间结构 分离纯化中要选择有效方法，防止目的物失活。 结构修饰，应用计算机研究蛋白和受体作用，设计小分子代替大分子，增强疗效。 对制备条件要求严格 ①不管是原料还是产品均为高营养物质，极易染菌腐败，因而对原料的采集、保藏、产品的生产等都有温度和无菌条件的要求 ②因有效成分含量低、稳定性差等对生产过程中的pH值、温度、剪切力、重金属含量、压力等操作条件均需严格控制； ③检测内容不但要有理化检测指标更要求有生物活性检验指标，对生物技术药物还需有工程菌(细胞)的各种分析资料及产物的鉴定分析资料； ④检测方法要求重现性好，有较高的灵敏度高和专属性； ⑤要求生产、管理人员具备一定的知识深度和相当的知识结构。 螺旋藻 在降低胆固醇和血脂，抗癌，减肥，养胃护胃，治疗贫血及微量元素缺乏，护肝，增进免疫，调整代谢机能等方面都有积极作用，被联合国粮农组织和联合国世界食品协会推荐为“二十一世纪最理想的食品”。  二．生物材料的采集与保存 （1）品种鉴定； （2）防止污染与感染； （3）选择富集目的物材料； （4）保存 制备有生物活性物质时，必须要材料新鲜及冷冻，有些还需防氧化。 保存方法：有速冻、冻干或制成“干粉”（脱水）、防腐剂。 如果需培养动物细胞，则将动物细胞保存于液氮中，培养时，再复苏。 丙酮粉制备 鲜猪胰绞碎，加3倍量0℃以下的丙酮，于0℃左右搅拌脱水1h，离心，湿饼继加3倍量丙酮，同法操作，湿饼置真空干燥箱抽干，粉碎，低温密闭保存，即得。 细胞复苏方法（ 非玻璃化冷冻） 　 （1）从液氮中取出冷冻管，迅速投入37～38 ℃水浴中，使其融化（1分钟左右）； 　 （2）5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上； 　　（3）低速离心10分钟； 　　（4）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。 1. 蛋白质类药物的分离纯化方法 所说的蛋白质类药物包括蛋白质、多肽和酶类等药物。分离纯化方法主要有： （1）蛋白质、酶的初分离----沉淀法。 常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、与靶物质结合沉淀法（如抗原—抗体）等。 （2）蛋白质的精制分离 按分子大小分离的方法 有超滤法和透析法（即膜分离法）、凝胶层析法、超速离心法等。其中膜分离法可用于生物大分子的浓缩、分级和脱盐。 按分子所带电荷进行分离的方法 氨基酸、多肽、蛋白质、酶均为两性电解质。根据它们的等电点不同，调节pH值进行离子交换、电泳、等电聚焦法等。 亲和层析法 大部分生物活性物质都有其作用的靶物质，如酶与底物（或抑制剂）、抗原与抗体、激素与受体等。 2.核酸类药物的分离纯化方法 核酸类药物生产方法主要有提取法和发酵法。 发酵法主要用于生产单核苷酸。 提取法生产DNA和RNA的主要技术 RNA、DNA在生物细胞内都与蛋白质结合成核蛋白，RNA·蛋白和DNA·蛋白在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。 DNA·蛋白在低浓度盐溶液中，如在0．14mol／L的氯化钠液中溶解度最低，几乎不溶解，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至lmol／L氯化钠中的溶解度很大。 相反，RNA·蛋白在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在0．14mol／L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。 再解离核酸与蛋白质,可通过加入适当的酶使不需要的物质降解,以利于核酸的分离与纯化。 然后进行核酸的分离与纯化:核酸的高电荷磷酸骨架使其比蛋白质、多糖、脂肪等其他生物大分子物质更具亲水性,根据它们理化性质的差异,用选择性沉淀、层析、密度梯度离心等方法可将核酸分离、纯化 常用的分离方法 乙醇沉淀法是从提取液中沉淀多糖最简易方法，也适用于分级分离。4-5倍体积的乙醇可以使任何结缔组织中的粘多糖完全沉淀。 离子交换层析法。粘多糖的聚阴离子能够很快地被阴离子交换剂吸附和分离，如Dowex I-X2离子交换树脂、DEAE-离子交换纤维素等。洗脱可用NaCl溶液进行梯度洗脱。 4.脂类药物的分离纯化方法 脂类自然状态下是以结合形式存在的。非极性脂是与其他脂质分子或蛋白分子的疏水区相结合的。 提取脂质药物就是要选择适当的溶剂来破坏这种结合键，将脂质溶解出来。 常用的溶剂有组合溶剂，醇是其中的主要成分，此外还有氯仿、甲醇、水等。水溶性杂质分配进入甲醇一水相