第七章动物细胞制药.pptVIP

应用 1.疫苗制备： 疫苗工业早期：普遍使用人工病毒感染的兔子和牛作为病毒疫苗的来源； 培养细胞为病毒的增殖提供了场所。举例：（1）Vero细胞（非洲绿猴肾细胞）和狂犬病毒的培养工艺（2）2005年11月，美国国会紧急拨款71亿美元用于预防疾病疫苗的研制，其中28亿用于细胞培养，（3）科技日报2006年7月13日讯，美国密西根州动物科学实验室的科研小组日前宣布，他们利用细胞培养技术，开发出制造人类流感疫苗的新方法。 2.单克隆抗体制备 3.病毒研究举例：SARS病毒的发现 病料——选择敏感宿主细胞——细胞培养——形态观察研究分析——疫苗制备 4.毒性检测实验（1）药物筛选（2）化学物质、放射性物质等的毒性检测 5.疾病诊断、治疗（1）遗传病的产前检查（2）器官、组织培养移植举例：  皮肤移植、功能细胞培养植入 日本用骨髓细胞培养皮肤 德研究人员用骨髓干细胞培养出精原细胞  不易引发排异反应的“万能细胞”培养成功（3）生产重组蛋白 动物细胞培养的产物 1996年1月至2002年12月美国获得成功批准的不同的治疗剂和诊断剂产品共31种，其中用哺乳动物细胞培养生产的就有21种。 ? 国际上，动物细胞培养表达生产生物药物产品的工艺目前已经开始采用万升级的工业大规模间歇式生物反应器，甚至悬浮连续式反应器； 动物细胞的培养方式也发展为悬浮连续式；培养介质也发展到先进的无动物蛋白培养液。 对生物反应器的控制已达到目前的现代计算机二级控制，正朝着人工智能以及细胞生化代谢分子水平的工业控制迅速发展。 思考题：动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？ 为什么？ 提示：脱分化又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。 植物的任何一部分，甚至单个细胞都具有长成完整植株的能力。但要发育成完整植株，必须先脱分化，脱分化的细胞具有发育成任何组织的能力，然后进行再分化，形成完整植株。植物细胞培养主要用于农林生产中的作物、苗木育种，快速繁育种苗、培育无病毒植株等，这就要求植物的组织或细胞先进行脱分化。 动物细胞的培养有各种用途，一般而言，动物细胞培养不需经过脱分化过程。 因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。 要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 微生物和动物细胞培养方法的比较 细胞密度 低密度 高密度 3T3 成纤维细胞样 上皮样细胞 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 提示：充足的营养供给 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 提示：无菌、无毒的环境。 适宜的温度、适宜的pH和气体环境。 细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。 人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。 鼠细胞渗透压320mOsm/kg 左右。 对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260－320mOsm/kg 的范围都适宜 培养基和细胞内的渗透压，一般采用平衡盐溶液 幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？ 提示： 细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。 问题：胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？用胃蛋白酶行吗？ 提示：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间和浓度。 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2－8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2－7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。 选择题 在动物细胞培养过程中，遗传物质发生改变的是 （ ） A.细胞株