cox2 shrna对hsc甘油三酯 胆固醇 维生素a代谢的影响word格式论文.docxVIP

COX-2shRNA对HSC甘油三酯、胆固醇、维生素A代谢的影响中文摘要目的：研究COX-2 在活化的肝星状细胞中的表达，探讨COX-2 与脂代谢关键基因ACC、HMGCR、CPT1a 在活化的肝星状细胞中作用的相互关系。构建COX-2 的shRNA，检测其在大鼠肝星状细胞HSC-T6 中对COX-2 基因表达的抑制作用，以及敲低COX-2 的表达后，观察COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a的表达变化，以及细胞内的甘油三脂、胆固醇、维生素A的含量变化，并进一步探讨COX-2 在肝纤维化的作用机制。方法：取肝星状细胞HSC-T6为研究对象。实验分为6组：第一组为shRNA序列1 组；第二组为shRNA序列2组；第三组为shRNA序列3组；第四组为阴性对照组；第五组尼美舒利药物组；第六组为空载体组。第一组至第第三组为活化的肝星状细胞中加入靶向COX-2基因的shRNA最佳剂量分别转染24小时、48小时、72 小时。用RT-PCR法检测每组肝星状细胞转染后COX-2、ACC、HMGCR、CPT1a 水平的mRNA表达；高效液相色谱法（HPLC）检测每组细胞内甘油三酯、胆固醇、维生素A的含量，从而确定靶向COX-2基因的shRNA沉默COX-2基因后对肝星状细胞脂代谢影响的时效关系。实验数据以±s表示，用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析，以P﹤0.05作为差异显著性标准。结果：加入靶向COX-2基因的shRNA最佳剂量分别转染24小时、48小时、72小时,结果显示：靶向COX-2基因的shRNA可有效敲低COX-2mRNA的表达，同时呈时间依赖性的减少HMGCR、CPT1的mRNA表达、增加ACC的mRNA表达。选择性COX-2抑制剂有同样的效果，但是转染组与药物组比较差异无明显统计学意义。HPLC结果显示：细胞内甘油三酯含量、维生素A呈时间依赖性增加；胆固醇呈时间依赖性减少。结论：1、COX-2可促进HMGCR、CPT1的表达，抑制ACC的表达。2、COX-2的表达被沉默后，可使HSC脂滴内的脂肪含量增加，HSC有可能重新脂肪化。关键词：肝星状细胞，环氧合酶-2,小发夹干扰RNA,PCR,高效液相色谱EffectsofshRNAtargetingCOX-2onmetabolismoftriglyceride、cholesterol、vitaminAinhepaticstellatecells(HSC-T6)AbstractObject:Theaimofthisstudywastoinvestigatetheoverexpressionandco-expressionof COX-2andsomeimportantgenesoflipidmetabolismsuchasACC、HMGCR、CPT1a inactivatedhepaticstellatecell, andtofindtheirrelationshiptoactivatedhepaticstellatecell.Cyelooxygenases-2(COX-2)-shortinterferingRNAisconstructed soastosuppresstheexpressionofCOX-2inactivatedhepaticstellatecell HSC-T6.Weexaminedtheeffectofthedown-regulationofCOX-2onexpressionofCOX-2、ACC、HMGCR、CPT1aandonexpressionof triglyceride,cholesterol,vitamin-A, to find out the effects of COX-2 on hepatic fibrosis.Methods:UsepassageHSC-T6asstudyobjects.Theexperimentisdividedinto6groups: ThefirstgroupisshRNA1group;thesecondgroupisshRNA2group;thethirdgroupis shRNA3group；theforthgroupisblankgroup; thefifth group isNimesulidegroupandthesixthgroupisnon-senseshRNAgroup.Andfromgroup3togroup5, the cell is exposed to shRNAtargetingCOX-2 at thebest concentration for24h、48h、72hrespectively,detecttheexpressionofCOX-2、ACC、HMGCR、CPT1ao