daxx亚细胞定位对oxldl诱导巨噬细胞凋亡影响word格式论文.docxVIP

主要英文缩略语索引缩写词全称中文名称bp BSADMEMbase pair Albumin,bovine serumdulbecco’s modified eagle medium碱基对牛血清白蛋白DMEM 高糖细胞培养基DAXXFas death domain-associated proteinFas 死亡结构域相关蛋白EBethidium bromide溴化乙啶EDTAethylene diamietetraacetic acid乙二胺四乙酸kDailodalton千道尔顿ODoptical density光密度PBSphosophate buffered saline磷酸盐缓冲液PCRpolymerase chain reaction聚合酶链式反应SDSSDS-polyacrylamide gel electrophoresisSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳ox-LDLOxidized lowdensity lipoprotein氧化低密度脂蛋白DMSOdimethl sulfoxide二甲基亚砜ASK1LMBApoptosis signal regulating kinaseLeotpmycin B细胞凋亡信号激酶 1核流出抑制剂1DAXX 亚细胞定位对 ox-LDL 诱导巨噬细胞凋亡的影响硕士研究生：李玲 导师：庹勤慧教授摘要目的: 观察 DAXX 的亚细胞定位对 ox-LDL 诱导 RAW264.7 巨噬细胞凋亡的影响， 为开辟以 DAXX 的亚细胞定位为手段，稳定斑块、防治急性冠脉综合征的新途径 提供理论依据。方法：构建人源性 DAXX 胞核定位突变质粒 DAXX（S667A）、胞浆定位突变质粒 DAXX（W621A）；瞬时转染 RAW264.7 巨噬细胞，应用 RT-PCR 和 Western Blot 技术检测转染后细胞内 DAXX 的表达情况和转染效率；同时，应用免疫荧光法观 察 DAXX 在细胞中的定位情况；转染 24h 后用 100μg/mL ox-LDL 孵育 48h，诱导 细胞凋亡，MTT 法检测细胞活性，流式细胞术观察细胞凋亡情况。应用 RT-PCR 和 Western Blot 分别检测 ASKI 和 JNK 的 mRNA 和蛋白的表达情况。 结果：DAXX 的两个突变重组质粒 DAXX（S667A）和 DAXX（W621A）经琼脂 糖凝胶电泳和 DNA 测序分析，证实突变正确，无其它突变和读码框移位。RT-PCR 和 Western Blot 法检测转染后细胞内 DAXX 表达的升高有显著性差异，表明转染 效率达到实验要求。免疫荧光法观察到 DAXX（WT）在胞核胞浆均有表达，且主 要定位于胞核；质粒 DAXX(S667A)定位胞核；质粒 DAXX(W621A)定位胞浆。瞬 时转染 24h 后细胞经 100μg/ml ox-LDL 孵育 48h，与正常对照组比较，MTT 法和 流式细胞术检测发现：转 DAXX(W621A)组细胞活性显著下调，凋亡率明显上升（p＜0.05）；转 DAXX (S667A)组细胞活性有所上调，且凋亡率下降；同时，RT-PCR 和 Western Blot 检测发现：转 DAXX(W621A)组细胞中 ASK1 和 JNK 的 mRNA 和 蛋白表达显著高于正常组（p＜0.05），而转染 DAXX (S667A)组细胞中 ASK1 和 JNK 的表达均低于正常对照组。结论：胞核定位 DAXX 可以抑制 ox-LDL 诱导的巨噬细胞凋亡；胞浆定位 DAXX 可以增敏 ox-LDL 诱导的巨噬细胞凋亡；其凋亡通路可能与 ASK1-JNK 介导的信 号通路有关。关键词：DAXX；胞核定位；胞浆定位；巨噬细胞；凋亡2Effect of the subcellular location of DAXX on apoptosis of macrophage cells induced by ox-LDLAbstractObjective: Aimed to evaluate the effects of subcellular localization of DAXX on ox-LDL induced the apoptosis of RAW264.7 cells.Background: The fuction of DAXX is different because of its different location, though the singnaling of apoptosis regulated by DAXX is well known. The role of DAXX, promote or hinder apoptosis, its still rem