erk12信号通路在gata4基因调控心内膜垫发育中的作用word格式论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 学位论文独创性声明 本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确说明并表示谢意。本课题得到国家中医药管理局中医肿瘤病学 重点学科经费资助。 学位论文作者签名： 日 期： 学位论文使用授权声明 本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定：学校有权保留 学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权允许 论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索， 有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。愿意将本人的学位论文提交《中国博士 学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》和《中国学位论 文全文数据库》中全文发表，并可以以电子、网络及其他数字媒体形式公开出版， 并同意编入 CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博硕士学位论文评价数据库》 中使用和在互联网上传播。保密的学位论文在解密后适用本规定。 学位论文作者签名： 导师签名： 日期： 日期： 目录 英文缩略词表 1 中文摘要 3 英文摘要 5 1 引言 7 2 材料 10 2.1 实验室10 2.2 实验细胞株 10 2.3 实验载体、菌株 10 2.4 主要试剂 11 2.5 实验仪器及设备 11 3 主要研究方法12 3.1 重组质粒的转化和验证 12 3.1.1 感受态细菌的制备 12 3.1.2 重组质粒转化 13 3.1.3 小量抽提去内毒素质粒 13 3.1.4 重组质粒测序验证 14 3.1.5 重组质粒菌液 PCR 鉴定 14 3.2 eGFP 绿色荧光蛋白报告质粒转化、筛选和验证 15 3.3 细胞培养15 3.3.1 细胞复苏、传代和冻存 15 3.4 细胞处理16 3.4.1 细胞转染16 3.4.2 细胞因子处理细胞 17 3.4.3 qRT-PCR 检测目的基因 mRNA 的相对表达水平 18 3.4.4 Western blotting 检测目的蛋白表达量 19 3.5 统计学分析 21 4 结果 21 4.1 GATA4 基因在心内膜垫发育过程中的作用 21 4.1.1 重组质粒的验证 21 4.1.2 GATA4 转染 Hela 细胞的表达 22 4.1.3 转染 GATA4 表达载体后心脏基质蛋白表达量的改变 24 4.2 GATA4 在 EGF 信号通路调控心内膜垫发育中作用研究 25 4.2.1 EGF 对心脏相关转录因子 GATA4 表达的影响 25 4.2.2 EGF 对心脏基质蛋白表达的影响 26 4.2.3 EGF 对信号传导分子表达的影响 27 4.3 GATA4 通过 BMP4 介导的信号通路调节下游基因 Sox9 和 Scleraxis 表达 28 4.3.1 BMP4 对转录因子 GATA4 表达的影响 28 4.3.2 BMP4 对心脏基质蛋白表达的影响 29 4.3.3 BMP4 对信号传导分子表达的影响 30 5 讨论 31 6 结论 37 7 参考文献 38 附录 44 致谢 45 综述及参考文献 46 英文缩略词表 英文缩写 CHD 英文全称 Congenital heart disease 中文全称 先天性心脏病 ECD Endocardial cushion defect 心内膜垫缺损 ECM Extracellular matrix 细胞外基质 BMP EGF Bone morphogenetic protein Epidermal growth factor 骨形态发生蛋白 表皮生长因子 DMEM dulbecco modified Eagle medium 改良 Eagle 培养基 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 EDTA ethylene diaminete tracetic acid 乙二胺四乙酸二钠 FBS febal bovine serum 胎牛血清 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 bHLH Basic Helix-Loop-Helix 基本螺旋-环-螺 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 MAPK Mitogen-activated protein kinase 丝裂原活化蛋白激酶 min minute 分钟 TAK1 TGF-β-activated kinase 1 TGF-β 激酶 1 ERK extracellular signal-regu