evn50对人视网膜母细胞瘤细胞生长和凋亡作用影响word格式论文.docxVIP

中文摘要目的研究黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制体外培养人视网膜母细胞瘤细胞（RB 细胞）生长作用以及诱导 RB 细胞凋亡作用，为开发和研制临床治疗人视 网膜母细胞瘤候选药物提供实验和理论依据。方法体外培养 RB 细胞；MTT 比色法测定 EVn-50 对 RB 细胞增殖活性的影响； 细胞计数法检测 RB 细胞存活率，绘制生长曲线；软琼脂集落形成法测定 EVn-50 抑制体外培养 RB 细胞的锚定非依赖性生长作用；PI 染色流式细胞术（FCM）定 量分析 EVn-50 诱导 RB 细胞凋亡程度；AO/EB 染色荧光显微镜观察 EVn-50 诱 导 RB 细胞凋亡的形态学改变；DNA 琼脂糖凝胶电泳确证 EVn-50 诱导 RB 细胞 凋亡作用。结果MTT 比色法测定结果显示：EVn-50 可作为黄荆子抗 RB 的有效提取物。 EVn-50 对 RB 细胞增殖活性抑制作用强，并呈浓度依赖性，其 IC50 为 9.60μg/ml； 细胞计数结果表明：0.3、3.0、30.0μg/ml 的 EVn-50 均具有抑制 RB 细胞生长作 用，呈浓度和时间依赖性；软琼脂集落形成法的结果表明：EVn-50 对 RB 细胞 锚定非依赖性生长具有明显的抑制作用，并呈浓度依赖性。PI 染色流式细胞术 分析的量效实验结果发现：0.3、3.0、30.0μg/ml 的 EVn-50 作用于 RB 细胞 48 小 时后的细胞凋亡率分别是(2.4±0.1)％、(17.4±0.6)％、(40.7±0.7)%；而时效实验中 30.0μg/ml 的 EVn-50 作用于 RB 细胞 24、48、72 小时后的细胞凋亡率分别是 (20.8±0.4)％、(40.7±0.7)％、(63.1±0.8)%；远高于空白对照组的凋亡率(0.8±0.3)%。表明：EVn-50 诱导 RB 细胞凋亡，并呈浓度和时间依赖性。AO/EB 染色荧光显微镜观察 EVn-50 处理后，部分 RB 细胞呈现胞质和胞核呈红色，核固缩或碎裂 的典型凋亡细胞形态特征。EVn-50 0.3μg/ml、3.0μg/ml、30.0μg/ml 分别处理 RB 细胞 48 小时，以及 EVn-50 30.0μg/ml 分别作用 RB 细胞 0、24、48 和 72h 琼脂 糖凝胶电泳出现典型―梯形‖DNA 条带。结论1. EVn-50 抑制体外培养人视网膜母细胞瘤细胞 RB 细胞生长，呈浓度和时间依 赖性；EVn-50 是黄荆子抗人视网膜母细胞瘤作用的有效提取物。2. EVn-50有效诱导人视网膜母细胞瘤RB细胞凋亡，呈浓度和时间依赖性。关键词 人视网膜母细胞瘤；黄荆子；黄荆子乙酸乙酯提取物；治疗作用Effects of the Acetoacetate Extract of the Vitex Negundo Seeds EVn-50 on Inhibition of Growth and Induction of Apoptosis in Human Retioblastoma CellsAbstractObjectiveTo screen the Acetoacetate extraction of Vitex Negundo Seeds against human Retioblastoma, and investigate the Acetoacetate extraction of Vitex Negundo Seeds (EVn-50) induce inhibition of growth induce apoptosis in RB cells, and evaluate the efficacy for Retioblastoma therapy by EVn-50 in vitro, in order to provide a laboratory and theoretic evidence for searching for a new potent and promising candidate for Retioblastoma chemotherapy.MethodsHuman retioblastoma cells were cultured in vitro. Then, MTT assay was used to determine the effect of the Acetoacetate extraction of Vitex Negundo Seed (EVn-50) on the proliferation of RB cells. The inhibition of the growth by EVn-50 in RB cells was u