er3 gd3和la3对taq dna聚合酶聚合活性的影响word格式论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘 要 随着稀土元素在农业、工业、畜牧业和现代药学等领域中的广泛应用，它将不可 避免的进入环境，并通过生态系统食物链等途径进入生物体。因此，有关稀土对生物 体的影响机制等问题一直是人们关注的重点。许多学者的研究结果都说明了稀土元素 对生物体DNA确有损伤作用，但有关稀土对DNA致突机理的研究较少，尤其是在DNA 分子水平方面的研究不多。 本实验的研究目的也是探讨稀土离子引起 DNA 损伤的机理，主要从稀土对 TaqDNA 聚合酶的作用着手。通过在 PCR 反应体系中加入不同浓度的稀土离子（La3+、 Gd3+和 Er3+）后，检测 PCR 产物 DNA 浓度、DNA 序列中碱基变化，然后借助紫外 光谱法和圆二色谱法来分析 TaqDNA 聚合酶立体构象的变化，从而确定稀土对 Taq DNA 聚合酶的作用是否会影响到 DNA 复制错误。 实验结果：在 PCR 反应过程中分别加入三种稀土离子，当 La3+和 Gd3+浓度在 1.0×10-3mol/L 和 1.0×10-8mol/L 之间时，对 PCR 反应的影响呈现出“低促高抑”的 Hormesis 现象，当其浓度大于 1.0×10-2mol/L 时，完全抑制 DNA 复制，而 Er3+总体呈 较强的抑制作用，当浓度低时，也没有激活作用出现；PCR 反应产物序列有多处碱 基发生错配；La3+、Er3+和 Gd3+会引起 Taq DNA 聚合酶的紫外可见吸收谱发生变化， 且稀土离子浓度越大，Taq DNA 聚合酶液在 222nm 处的吸收峰值越低；通过圆二色 谱测定，稀土离子可影响 TaqDNA 聚合酶的二级结构，低浓度的稀土离子能引起 TaqDNA 酶 α-螺旋含量的增加，而高浓度稀土离子引起酶 α-螺旋含量降低。 实验结果说明了稀土离子可影响 TaqDNA 聚合酶的立体构象，除了能改变酶的 DNA 复制活性，也可引起 DNA 复制时碱基错配。这一实验结果也说明了稀土是一种 诱变剂，引起基因突变的机制之一可能是改变 TaqDNA 聚合酶的立体构象，干扰了 酶与底物 dNTP 结合位点，从而引起复制错配。 关键词：稀土；Taq DNA 聚合酶；DNA 损伤；圆二色谱 Abstract With the wide use of rare earths in agriculture, industry, livestock agriculture and modern medicine areas, they inevitably enter the environment, furthermore to organisms through eco-system and the food chain. Therefore, the action mechanism of rare earth on the organisms has attracted most scientific interest. Many research results showed that rare earths could indeed damage the organism DNA, but a few studies were performed about the damage mechanism, especially in level of DNA molecules. This study investigated DNA damage mechanism induced by rare-earth ions, which was started mainly from the role of rare earth on TaqDNA polymerase. By adding different concentrations of rare earth ions (La3+,Gd3+ and Er3+) in the PCR reaction system, the effects of rare earth on Taq DNA polymerase were measured through PCR products concentration and base changes in the DNA sequence. Then ultraviolet spectroscopy and circular dichroism method were used to analyze the changes of TaqDNA polymerase conformation. The experimental results showed that