第七章 微生物的菌种选育.pptVIP

第七章 微生物的菌种选育 在应用微生物加工制造和发酵生产各种食品的过程中，要想有效地大幅度提高产品的产量、质量和花色品种,首先必须选育优良的生产菌种，才能达到目的。 本章主要内容 第一节 微生物的菌种选育 在微生物工业应用中， 微生物菌种工作主要包括以下四方面： ① 菌种的分离筛选； ② 菌种培育； ③ 菌种的保藏； ④ 退化菌种的复壮。 一、从自然界中分离筛选菌种的方法步骤 （一）诱变育种的一般步骤和方法出发菌株同步培养  使菌细胞处于相同或接近的生理状态.单细胞（或单孢子）菌悬液的制备 单细胞或单孢子的意义 酵母或霉菌孢子106 -107 /ml 、细菌和放线菌108 /ml 诱变剂的选择 ① 物理诱变剂 ② 化学诱变剂诱变剂剂量的确定 以致死率为90％～99％ 为宜  确定出发菌株 ↓ 菌种的纯化选优 ↓←出发菌株的性能鉴定 同步培养 ↓ 制备单细胞（或单孢子）悬液 ↓←活菌浓度测定 诱变剂的选择与确定诱变剂量的预试验 ↓ 诱变处理 ↓ 平板分离 ↓计形态变异的菌落数，计算突变率 挑取疑似突变菌落纯培养 ↓ 突变体的初步筛选 ↓←用简单快捷的方法 重复筛选 ↓←摇瓶发酵试验 选出突变体（根据情况进行生产试验或重复诱变处理） 二、微生物的诱变育种 1 筛选用培养基 ⑴ 基本培养基：凡是能满足某种野生型菌株营养要求的最低成分的合成培养基，称为基本培养基；常以‘[-]’表示； ⑵ 在基本培养基中加入一些富含氨基酸、维生素及含氮碱基之类的天然有机物质如蛋白胨、酵母膏等，以满足该微生物的各种营养缺陷型菌株都能生长繁殖的培养基，称为完全培养基，常用‘[+]’表示； ⑶ 在基本培养基中只是有针对性地加入某一种或某几种营养缺陷成分，以满足相应的营养缺陷型生长的培养基，称为补充培养基，补充培养基可按所加入营养成分相应地用‘[A]’、‘[B]’等来表示。 检出营养缺陷型 鉴定营养缺陷型 ① 含营养缺陷型菌株的基本培养基平板的制备。 ② 营养缺陷型营养类别的鉴定。 ③ 缺陷型菌株单一营养因素的鉴定。 三、原生质体融合育种 细胞（A+B—） 细胞（A—B+） 脱壁处理 脱壁处理 原生质体（A+B—） 原生质体（A—B+） 混合 ? 加融合剂 原生质体融合 涂平板（原生质体再生） 形成菌落 检出重组子菌落（A+B+） 四、转基因工程菌株的构建 1．提取目的基因； 2．处理目的基因； 3．体外重组； 4．载体传递； 5．复制、表达； 6．筛选、繁殖。 第二节 微生物菌种的保藏和复壮一、菌种的保藏 1．低温保藏法 斜面菌种直接放入0～4℃冰箱中保藏，保存时间不宜过长，一般为 3～6个月； 用-20℃以下的超低温冰箱或干冰、液氮（-195℃）冻结保藏，长达数年。 2．干燥保藏法 主要是指把菌种接种到适当载体上，在干燥条件下进行保藏。这种保藏方法主要适合于细菌的芽胞和霉菌的孢子。细菌芽胞用沙土管保藏；霉菌的孢子多用麸皮管保藏。 一、菌种的保藏 3．隔绝空气保藏法 用固体石蜡密封试管口以隔绝空气。 4．真空冷冻干燥保藏法 其基本过程是：培养菌种→加菌种保护剂（一般食品工业用菌种多用牛乳作保护剂）→分装、预冻→真空冻干→真空封口。 5．寄主保藏法 用常规方法保藏的动植物病原菌和病毒。 二、菌种的退化与复壮 （一）常见的菌种退化现象 （二）菌种退化的原因 菌种退化的主要原因是有关基因的负突变。 （三）防止菌种退化的措施 1．控制传代次数 2．创造良好的培养条件 3．利用不同类型的细胞进行移种传代 4．采用有效的菌种保藏方法 （四）退化菌种的复壮 * * 微生物菌种的选育 ? 关于野生