PCR检测卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因的研究.docVIP

PCR检测卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因的研究 　　中国医科大学学报2000年第29卷第1期 温放　何秀琴　孙贵范　皮静波 　　关键词：卵巢　肿瘤　谷胱甘肽转移酶　多聚酶链反应 　　卵巢恶性肿瘤是严重危害妇女健康和生命的疾病。由于自由基是诸多化学、酶和生物学反应过程中活泼的中间体，而且在生物大分子和机体损伤过程中大量存在，机体内对自由基酶清除有一完整的抗氧化防御系统，谷胱甘肽转移酶μ(glutatine-s-transferase, gSTμ)在此系统中占有重要位置［1］。本文应用PCR方法对卵巢良、恶性肿瘤及健康女性进行了外周血GSTμ基因检测，以期了解卵巢恶性肿瘤与外周血GSTμ基因缺失之间的关系 　　1　对象与方法 　　1.1　研究对象 　　1994年3月～1997年6月我科住院卵巢肿瘤患者137例，其中卵巢良性肿瘤50例，恶性肿瘤87例(表1)。健康女性采用本校癌症预防中心同期普查正常女性78例。实验组于术前、健康女性于普查时采取静脉血2 ml，由专人做GSTμ基因检测。 表1　卵巢良、恶性肿瘤病理分类Table 1 The patholo gical classification of ovarian 　　carcinoma and benign neoplasm 肿瘤性质n上皮类生殖细胞类特异性性腺间质类转移良性 　　恶性50 　　8724 　　7020 　　56 　　7— 　　5　　1.2　方法 　　1.2.1　DNA模板制备：取50 μl全血与0.5 μl TE缓冲液混合，离心去上清，重复2～3次。在沉淀中加入100μl钾缓冲液，悬浮沉淀。56℃保温45 min消化细胞，95℃ 10 min灭活蛋白酶K后离心5 min，取上清10～20 μl用于PCR检测。 　　1.2.2　PCR条件：在100 μl反应体系中进行PCR由DNA合成仪合成(Techne公司产)，DNA聚合酶为日本和光钝药工业株式会社生产。 　　1.2.3　电泳及造像：扩增后的基因产物做琼脂平板电泳，电流80 a，电压240 V，pH 8.12内加溴化乙啶染色液。电泳后于300 μm紫外线透射仪上观察、摄片。在1.6%琼脂上，250 bp处清楚显示一条GSTμ基因扩增物，有荧光者为GSTμ基因携带，无荧光者为缺失。2　结果 　　2.1　卵巢恶性肿瘤组、卵巢良性肿瘤组及健康女性组外周血GSTμ基因检测结果见表2。 表2　3组外周血GSTμ基因缺失率比较Table 2 The deletion proportion comparison of GSTμ 　　gene in the peripheral blood of the 3 groups 分　　　组nGSTμ基因缺失恶性肿瘤 　　良性肿瘤 　　健康女性87 　　50 　　78　63(71.4)* 　　29(58.0) 　　41(52.6)　　(　)内为百分率；*与健康女性组比较 P＜0.052.2　卵巢恶性肿瘤患者中已绝经者，未绝经者与健康女性组外周血GSTμ基因检测结果比较见表3。 表3　绝经前后两组外周血GSTμ基因缺失率比较Table 3 The deletion proportion comparison of GSTμ in 　　the peripheral blood of the 2 groups (premeno- 　　pause and postmenopause) 分组nGSTμ基因缺失卵巢恶性肿瘤　绝经前3520(57.1)绝经后5242(80.8)*＃健康女性　绝经前5029(58.0)绝经后2812(42.9)　　(　)内为百分率；* 与本组绝经前比较P＜0.05；＃与健康组绝经后比较 P＜0.012.3　卵巢恶性肿瘤患者中，能准确进行临床分期62例，本文仅就62例做一比较，见表4。 表4　不同临床分期卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因检测结果比较Table 4 The comparison of the GSTμdetection in the 　　peripheral blood of ovarian carcinoma of diffe- 　　rent clinical stages 临床分期nGSTμ基因缺失Ⅰ 　　Ⅱ 　　Ⅲ8 　　2 　　52　6(75.0) 　　1(50.0) 　　30(57.7)　　Ⅱ期患者例数过少，本文仅就Ⅰ期与Ⅲ期进行比较，两者之间差异没有显著意义(P＞0.05)。 　　2.4　卵巢恶性肿瘤分化程度与外周血GSTμ基因缺失率的关系 　　卵巢恶性肿瘤标本中，能准确进行肿瘤细胞分化程度判定44例，比较结果见表5。表5　不同分化程度卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因检测结果比较(例，%) 　　Table 5 The comparison of G