急性髓系白血病survivin基因与早期分化抗原cd34表达的研究-study on the expression of survivin gene and cd34 antigen in acute myeloid leukemia.docx

急性髓系白血病Survivin基因与早期分化抗原CD34表达的研究专业：临床检验诊断学研究生：谷大伟导师：马莉教授摘要目的：通过检测急性髓系白血病（acutemyeloidleukemia，AML）患者和对照组患者骨髓细胞中survivin基因和CD34+的表达，探讨它们的表达在AML发生发展中的意义。方法：采用流式细胞术进行白血病免疫分型及survivin与CD34+的检测，使用瑞氏染色法进行细胞形态学分析。结果：1.survivin+/CD34+双表达：AML患者骨髓细胞的survivin+/CD34+双表达明显高于对照组患者（P0.01），且治疗缓解组低于治疗未缓解组（P0.01）。2.survivin+/CD34-表达：AML患者骨髓细胞的survivin+/CD34-表达明显高于对照组患者（P0.05），且治疗缓解组低于治疗未缓解组（P0.05）。结论：1.骨髓细胞中survivin表达的检测对血液疾病的转归具有初筛的作用；2.骨髓细胞中survivin的表达比CD34和白血病发生、发展的关系更加密切；3.骨髓细胞中survivin的表达对AML的治疗效果及预后有一定的评估价值。关键词：Survivin基因急性髓系白血病流式细胞技术CD341.前言白血病（Leukemia）是造血干/祖细胞于分化过程的不同阶段发生分化阻滞、凋亡障碍和恶性增殖而引起的一组异质性的造血系统恶性肿瘤［1］。白血病在世界范围内的日渐高发且趋于低龄化也引起学者们的广泛关注，大量研究表明白血病的发生与癌基因的激活、抑癌基因的失活及细胞凋亡受抑有关，所以除了经典的耐药途径外，其他耐药机制，如凋亡抑制蛋白(inhibitorsofapoptosis,IAP)途径，近来日益受到人们重视［2］。Survivin又名生存素或存活素，是1997年由耶鲁大学Alfieri等［3］利用效应细胞蛋白酶受体-1(EPR-1)cDNA在人类基因组文库的杂交筛选中首次分离出来，它是凋亡抑制蛋白家族中的新成员，是迄今发现最强的凋亡抑制因子。survivin大量表达于胚胎及婴幼儿组织中，正常组织中只有少量表达，而在60余种肿瘤细胞株和大部分人体肿瘤组织中过度表达［4］，也包括白血病细胞系［5］。之前针对survivin的研究大多是研究实体肿瘤组织中survivin的表达情况和相关机制，而近几年survivin与白血病的相关性开始进入人们的视线。白细胞表面分化抗原CD34是造血干细胞或（和）祖细胞的特异性标志，正常人骨髓中只有少量CD34+，约占单个核细胞的1.0％～4.0％［6］，在AML细胞上则有较高频率的表达。近年国外文献报道部分造血系统恶性肿瘤尤其是急性白血病（AL）存在早期分化抗原，如CD34、CD90和CD133的异常表达，作为干及祖细胞标志又是重要黏附分子的CD34与急性白血病的发生发展有密切关系，因此CD34的检测可以使白血病疗效的观察更具有针对性。最近Fukuda［7］等的研究发现survivin并不是一个肿瘤特有的凋亡抑制蛋白，它也表达于正常成人脐血和骨髓来源的CD34+细胞，与肿瘤细胞survivin的表达不同，CD34+整个细胞周期均表达survivin，而survivin表达的增减与细胞凋亡的抑制或增加相一致。本研究利用流式细胞技术检测骨髓细胞中survivin和CD34的表达，分析讨论二者的关系，以及这种关系对白血病发生发展的影响，从而为白血病的诊疗提供新思路新方法。2.1材料2.1.1实验分组2.材料与方法AML组：共31例，标本均来自2010年7月-2011年1月贵阳医学院附属医院血液科收治的成年住院病人，年龄范围：19～60岁，平均34.3±12.9岁。所有病例经临床及实验室检查确诊,符合世界卫生组织（WHO）诊断标准及英美法协作组（FAB）诊断标准［1］。又分为治疗未缓解组和治疗缓解组。治疗未缓解组：19例（M0型1例、M1型2例、M2型6例、M3型3例、M4型5例、M5型2例），以上标本在确诊后经过2-4个月的临床治疗未达到目前公认的完全或部分缓解标准［1］。治疗缓解组：12例（M1型1例、M2型3例、M3型7例、M7型1例），以上标本在确诊后经过2-4个月的临床治疗达到目前公认的完全或部分缓解标准［1］。对照组（非恶性血液病组）：8例（缺铁性贫血3例、特发性血小板减少性紫癜1例、传染性单核细胞增多症2例、骨髓未见明显异常2例）。标本均来自2010年7月-2011年1月贵阳医学院附属医院血液科收治的成年住院病人，年龄范围：23～59岁，平均35.8±2.3岁。所有病例经临床及实验室检查确诊，且抽取标本时未给予任何临床治疗。2.1.2标本的采集骨髓的采集均在髂前或髂后上棘部位进行穿刺抽取骨髓液1ml，后立即置于含有2ml肝素抗凝剂的生化管中