检测端粒酶及nk细胞鉴别良 恶性胸腔积液的实验分析-experimental analysis of detecting telomerase and nk cells in differentiating benign and malignant pleural effusion.docxVIP

检测端粒酶及NK细胞鉴别良、恶性胸腔积液的实验研究摘要目的g胸腔积液是临床上常见的疾病。既可原发于胸膜?亦可继发于全身其他系统疾病F作为某种特定疾病的并发症或临床表现。正确地对胸腔积液的性质作出判断?一直是临床上重视的问题。然而?虽然经过胸水细胞学、胸膜活检等检查后，仍有相当部分病例不能明确诊断。因而萨尽蠢减少有创检查及提高恶性胸腔积液的诊断率的研究?日益为临床所关注。对于细胞学阴性的可疑恶性胸腔积液，测定肿瘤标志物有助于诊断。近十年来已探讨了许多肿瘤标志物对恶性胸腔积液的诊断价值p其敏感性和特异性均不满意F目前倾向多指标联合检测以提高诊断率。端位酶是一种核糖核蛋臼复合体声由民NA和蛋白质组成F具有逆转录酶活性，能以自身RNA为模板从头合成端粒序列以补偿细胞分裂时染色体端粒的缩短。在正常的人体细胞中F端粒程序性的缩短限制了转化细胞的生长能力。端粒酶的重新表达在细胞永生化及癌变过程中起着重要的作用。端粒酶的激活是细胞获得无限增殖能力〈永生性〉的共同途径。端粒酶作为肿瘤标志物F首先开始于1994年Counter等发现端粒酶活力存在于卵巢癌转移的腹水中F而正常卵巢上皮组织中缺乏。Kim和Counter等结合PCR技术改进了检测端粒酶活性方法后F分别报道端粒酶与肿瘤具有密切相关性，其诊断阳性率85%-90%。后来，Nelson在总结这方面研究认为，对于端粒酶的检测己有临床应用价值。大多数科学家同意端粒酶是恶性肿瘤的生物标记，并能反映肿瘤从良性转变成恶性过程。因此，端粒酶活性改变是目前人们建立的最显著的肿瘤标志物。目前，国外己将端粒酶活性检测应用于尿液、大肠冲洗液、口腔漱洗液、宫颈脱落细胞及乳腺穿刺标本的肿瘤诊断研究。但对恶性胸腔积液细胞端粒酶活性的研究报道较少，有待于进一步研究。近年来发现端粒酶在肿瘤组织中活性较高，己初步用于胸腔积液的检测。NK细胞是一组非抗原依赖性效应细胞，在机体抗肿瘤、抗感染及其他许多免疫反应活动中具有重要作用。恶性肿瘤的发生、发展与机体免疫系统功能状态密切相关。肿瘤患者通常伴有免疫抑制或损害。自从1973年Takasngi和Herberman分别发现人和小鼠的淋巴细胞不经特异性免疫，也无需抗体参与就能在体外杀伤某些肿瘤细胞后，各国学者对NK细胞与肿瘤之间的关系进行了大量研究。有报道一些肿瘤能释放某些物质使NK细胞活性下降或肿瘤患者血中存在某些免疫复合物能与NK细胞结合使之失活。近年来，随着单克隆抗体的出现，人们常以CD16或CD56作为NK细胞的标志。目前，国内外对NK细胞测定多以外用血为检验标本，而对于恶性胸腔积液细胞中的NK细胞研究则少有报道。本研究，观察良性、恶性胸水细胞中的端粒酶及NK细胞表达情况，了解测定胸水细胞端粒酶及NK细胞计数对于恶性胸腔积液的临床诊断价值，探讨提高恶性胸腔积液诊断率的实验方法。2方法:选择2002年2月至2003年2月符合条件的住院的胸腔积液病人。分为恶性胸腔积液组和对照组。其中步恶性胸腔积液均经病理学和/或细胞学而证实9良性胸腔积液均经临床特点、病原学、细胞学、临床治疗观察等而证实。恶性胸腔积液组60例?其中童男性37例、女性23例F年龄32，...，80岁。良性胸腔积液纽约例?其中?男性18例、女性12例F年龄30--82岁。胸腔穿刺术采集胸腔积液9静脉穿刺术采集外周血液?肝索抗凝处理，制备有核细胞为检测样本。应用端粒末端重复片段扩增法(TRAP)，检测端粒酶:应用流式细胞术(flowcytome町，FCMλ检测NK细胞。对于端粒酶检测结果，采用卡方检验方法(Chi幡squaretest，X2test)分析组间差异9以PO.05为差异有显著性:对于NK细胞检测结果9采用t检验方法(ttest)分析组间差异，以P0.05为差异有显著性。结果:①端粒酶检测结果:在恶性组，胸水发现端粒酶阳性表达的患者有42例(70%)，血液端粒酶阳性表达的患者16例(26.7%)。而在对照组9胸水及外周血均无端粒酶阳性表达。恶性组与良性组端粒酶阳性结果经统计学处理，具有非常显著性差异(p0.01)。②NK细胞检测结果:恶性组F血液为11.57士9.37%、胸水为11.53士9.72%;良性组，血液为8.88:t4.05%、胸水为8.32土4.33%。两组之间检泌NK细胞的差别F无统计学意义(P0.05)。结论z本实验研究，检测胸水端粒酶指标对良、恶性胸腔积液的诊断与鉴别诊断具有较高的应用价值，其特异性为100%、敏感性为70.0%。研究也发现，NK细胞计数在良、3恶性胸腔积液之间无统计学意义，故检测NK细胞计数对良、恶性胸腔积液的诊断与鉴别诊断似无临床意义。关键词z恶性胸腔积液:良性胸腔积液;端粒酶:端粒末端重复序列扩增法;NK细胞:流式细胞术4ExperimentalStudiesoftheA