hif1α vegf在门静脉高压症食管静脉曲张大鼠食管下段中的表达-expression of hi f1 α vegf in the lower esophageal segment of esophageal varices rats with portal hypertension.docxVIP
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hif1α vegf在门静脉高压症食管静脉曲张大鼠食管下段中的表达-expression of hi f1 α vegf in the lower esophageal segment of esophageal varices rats with portal hypertension
学位论文独创性声明本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明,愿意承担以下责任和后果:1、交回学校授予的学位证书;2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报;3、本文按照学校规定的方式,对因不当取得学位给学校造成的名誉损害,进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名:日期:年月日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名:日期:年月日指导教师签名:日期:年月日(本声明的版权归山西医科大学所有,未经许可,任何单位及任何个人不得擅自使用)前言食管静脉曲张破裂出血是门脉高压症的严重并发症,肝硬化门静脉高压症患者中,有40%的患者出现食管胃底静脉曲张,其中有食管胃底静脉曲张的患者50%~60%并发大出血。因此,预防和控制食管静脉曲张的发生和发展就显得十分重要。多项研究表明,食管静脉曲张破裂出血的发生率与食管静脉曲张的程度呈正相关。而曲张静脉的形成与发展是在多种因素的参与下完成的,其中多种体液因子的改变起着至关重要的作用,在门脉高压症患者中,当门静脉压力升高时,血液通过门静脉-胃左静脉-食管静脉分流,使食管静脉的压力也随之升高,食管静脉过高的压力造成血管内膜损伤,血管壁结构异常,体液因子的平衡被打破,促进血管生成的因素占上风,血管发生重建及新生。大量研究证实,HIF-1α和VEGF与血管的重建过程密切相关[1,2]。HIF-1是Semenza和Wang[3]于1992年观察低氧的肝细胞癌细胞株Hep3B细胞的核提取物时发现的一种蛋白,该蛋白能特异性地结合于促红细胞生成素基因的低氧反应元件上,该蛋白被称之为低氧诱导因子-1。HIF-1是一种由826个氨基酸组成的DNA结合蛋白,是由一个120KD的α亚单位和一个91/93/94KD的β亚单位组成的异源二聚体[4,5]。HIF-1是迄今为止发现的唯一能在缺氧状态下发挥转录活性的因子,能够调控VEGF等70余种基因的转录[6],从而参与红细胞生成、血管生成、血管重建、能量代谢、细胞增殖与凋亡等生理活动[7]。VEGF与其受体结合后可增强血管内皮细胞的有丝分裂,促进血管内皮细胞增殖和迁移从而促进血管形成,提高血管尤其是微血管的通透性,使血浆中的大分子外渗并聚集在血管外基质中,为新生血管的建立提供营养支持[8,9]。VEGF还能促进血管发生的始动因素--骨髓源性的内皮前体细胞(endothelialprogenitorcell,EPC)聚集和活化促进血管生成[10]。因此,HIF-1α作为上游调控基因在新生血管形成中的作用要比单纯VEGF和血管生成素-2(angiogenin-2,Ang-2)等基因更有效率。但是在门静脉高压症食管静脉曲张大鼠的食管下段局部是否也存在HIF-1α和VEGF的改变还不是十分清楚。为此,我们通过建立门静脉高压症食管静脉曲张大鼠模型,并运用免疫组化技术检测HIF-1α和VEGF在门静脉高压食管静脉曲张大鼠食管局部的表达情况,探讨这些体液因子在食管静脉曲张的发生和发展过程中的动态变化及其意义。材料和方法一实验材料1主要试剂及仪器1.1主要试剂(1)兔抗大鼠VEGF多克隆抗体(即用型);(2)兔抗大鼠HIF-1α多克隆抗体(即用型);(3)SABC(StreptAvidin-BiotinComplex)试剂盒;(4)PBS缓冲液;(5)DAB显色液;以上试剂均购自武汉博士德生物技术有限公司。1.2仪器(1)日本产奥林巴斯BH-2型显微镜一台;(2)日本产PIKA常温切片机一台;(3)国产黄石B3-A恒温烤箱一台;(4)免疫组化计算机图像分析系统(BI-2000);(5)国产22OL新飞冰箱一台;(6)国产成都BL420型多道生理信号记录仪一台;(7)国产上海显微手术器械一套;20G钝头注射针头;无损伤缝合线3-0;1ml注射器;无菌纱布等(8)法国产GILSON移液器(0.5~10ul)1支;国产金华移液器(40~200ul)1支。2实验动物清洁级雄性Wistar大鼠60只,体重162g~215g,饲
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