hif1α调节神经母细胞瘤生物学特征的机制分析-mechanism analysis of hi f1 α regulating biological characteristics of neuroblastoma.docxVIP
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hif1α调节神经母细胞瘤生物学特征的机制分析-mechanism analysis of hi f1 α regulating biological characteristics of neuroblastoma
上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月HIF-1α调节神经母细胞瘤生物学特征的机制研究摘要目的:神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是最常见的儿童恶性实体肿瘤之一,其总体治疗效果不佳。当肿瘤快速生长、血供不足时,其内部常产生低氧现象。低氧诱导因子-lα(hypoxia-induciblefactor-lα,HTF-lα)是重要的转录因子,在低氧下调节肿瘤细胞的许多生物学行为,如生长、侵袭、血管生成、耐放化疗等。本研究旨在阐明HTF-lα对NB生长、侵袭、去分化的影响及其作用机制。方法:首先我们构建HTF-lα过表达以及核糖核酸(ribonucleicacid,RNA)干扰的慢病毒载体。用免疫组化测定临床NB标本中HTF-lα、SonicHedgehog(SHH)信号通路蛋白表达,并评价和肿瘤分期、分化、淋巴结转移、预后的关系。通过慢病毒载体转染,使2种NB细胞(SH-SY5Y和TMR32细胞)的HTF-lα过表达或基因沉默,从而研究HTF-lα在NB增殖、迁移、侵袭中的作用,并运用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)和Westernblotting评价HTF-lα对SHH通路的调控作用。此外,建立裸鼠移植瘤模型,在体内验证HTF-lα对NB细胞生长的影响。并通过流式细胞仪,从SH-SY5Y细胞中分选出侧群(sidepopulation,SP)细胞和非侧群细胞,比较两者HTF-lα和SHH信号分子的差异。通过慢病毒转染,使SP细胞HTF-lα过表达或沉默后,运用Westernblotting、免疫荧光、实时荧光定量PCR评价HTF-lα对SP细胞肿瘤干细胞标志物(ABCG2,Oct4,c-kit)表达的影响。结果:HTF-lα和SHH信号分子SHH、PTCHl、GLTl在NB标本中的阳性率分别为57.7%、64.8%、46.5%、54.9%。Spearman相关分析显示NB标本中HTF-lα和SHH、GLTl的表达水平呈正相关,HTF-lα、SHH、GLTl的表达水平和肿瘤分期呈正相关。伴淋巴结转移者SHH、GLTl阳性率更高,而分化差的肿瘤HTF-lα、GLTl的阳性率更高。Kaplan-Meier生存分析显示HTF-lα或SHH阳性者较阴性者2年存活率更低。HTF-lα在常氧、低氧下均能促进NB细胞侵袭,但仅在低氧下促进其增殖和迁移。实时荧光定量PCR和Westernblotting显示,HTF-lα在转录水平正向调节NB细胞的SHH通路,进而影响其蛋白表达。裸鼠移植瘤模型证实HTF-lα可在体内促进NB生长并调节SHH通路。SP细胞肿瘤干细胞标志物(ABCG2,Oct4,c-kit)的mRNA和蛋白水平较非SP细胞明显升高,HTF-lα同样可正向调节SP细胞肿瘤干细胞标志物的表达。阻断SHH通路后,HTF-lα促NB细胞生长、迁移、侵袭、去分化的作用可被逆转。结论:HTF-lα通过SHH信号通路促进NB生长、侵袭、去分化。关键词:神经母细胞瘤,低氧诱导因子因子-lα,SonicHedgehog信号通路,细胞生长,细胞侵袭,肿瘤干细胞ThemechanismresearchofthebiologicalcharacterregulationofHIF-1αinneuroblastomaAbstractObjectve:Neuroblastoma(NB)isoneofthemostcommonpediatricmalignantsolidtumorsanditsoveralloutcomeisnotsatisfactory.Hypoxiaisacommoneventinaggressivetumorsthatoccurswhenatumorgrowsfast,andthebloodsupplyisinsufficient.Hypoxia-induciblefactor-lα(HTF-lα)isanimportanttranscriptionfactorregulatinganumberofbiologicalbehaviorsofcancercellsunderhypoxiasuchasgrowth,invasion,angiogenesisandresistancetoch
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