利用纤维材料生产l-production of l by fiber materials.docxVIP

摘要L-乳酸及其衍生物在食品、生物医药和化工等行业有着重要的应用。近几年，随 着生物可降解塑料聚 L-乳酸（PLLA）的广泛应用，对 L-乳酸的需求量也急剧增加。 同步糖化和发酵法（SSF）是目前国内外生产高纯度 L-乳酸的主要方法。但是，同步 糖化和发酵法在处理玉米等粮食原料或者木质纤维素时存在众多问题：糖化和发酵的 最优温度不同，终产物反馈抑制，添加淀粉酶或纤维素酶造成高成本等缺点。因此， 以纤维降解微生物一步法降解木质纤维素生产 L-乳酸的方法，即联合生物加工（CBP） 就具有很大潜力。此方法不仅降低生产成本、节约粮食，更解决了秸秆等处理不当造 成的资源浪费和环境污染问题。但是具有纤维材料降解能力的菌种罕见报道。本研究 以前期分离鉴定的一株具有纤维降解能力的粪肠球菌 CTB374-1 作为菌种，采用联合 生物加工（CBP）方案一步生产 L-乳酸。主要研究内容和结果如下：（1）用 NREL 法对玉米、棉花、小麦、大豆、谷子、高粱六种农作物秸秆中纤 维素、半纤维素和木质素的含量进行了测定。了解这些纤维材料的特性为将其应用于 L-乳酸的生产提供基础知识。（2）紫外诱变提高菌种 L-乳酸的产量，通过单因素试验确定了紫外诱变的最佳 照射时间为 30s，并筛选到一株 L-乳酸高产菌株 CTB374-1-8，其发酵底物为葡萄糖 产 L-乳酸为 15.22 g·L-1，比出发菌株 CTB374-1 提高了 30.37%。（3）对 CTB374-1-8 产 L-乳酸的培养条件和发酵培养基进行了优化。通过单因 素试验确定最优发酵条件为：发酵温度 37 ℃；接菌量 5%；发酵时间 60 h；初始 pH 7.5；好痒发酵；纤维素原料玉米秸。通过 Plackett-Burman 试验和 Box-Behnken 试验 对发酵培养基成分进行了优化。最终确定蛋白胨、柠檬酸三铵和 K2HPO4 是影响 CTB374-1-8 产 L-乳酸的主要因子，三因子最佳组合为蛋白胨 11.71 g·L-1，柠檬酸三 胺 2.29 g·L-1，K2HPO4 2.39 g·L-1 时，CTB374-1-8 以玉米秸发酵产 L-乳酸达到 1.173 g·L-1，比优化前提高了 86%。关键词：粪肠球菌；纤维材料；L-乳酸；紫外诱变；响应面优化AbstractL-lactic acid and its derivatives are widely applied in food, bio-medicine and chemical industry. In recent years, with bio-degradable plastic, poly-L-lactic acid extensively being used, the demand of L-lactic acid has increased dramatically. In current technology, the simultaneous saccharification and fermentation(SSF) is the main method for producing high purity L-lactic acid at home and abroad. Howerever, there are some disadvantages in simultaneous saccharification and fermentation(SSF). For example, the different optimal temperature for saccharification and fermentation, the feedback inhibition of the final product, the increasing cost due to adding amylases or cellulases. Therefore, the consolidated bioprocessing(CBP) has tremendous potential.In CBP, one kind of microorganism was used to degrade cellulose and produce L-lactic acid. This processing not only reduces the cost of production, but solves environmental pollution from crop residues. But the strain is a limiting factor in CBP. In this paper,a strai