食品微生物检验基本的 常识与方法.ppt

食品学院 3、根据证实为大肠菌群阳性的管数，查找MPN检索表，报告每1ml（g）大肠菌群的MPN。 食品学院 MPN法简介The Most Probable Number Method 食品学院 大肠菌群测定——MPN法检验几点说明 MPN检索表： MPN 为最大可能数(Most Probable Number)的简称。这种方法，对样品进行连续系列稀释，加入培养基进行培养，从规定反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。 食品学院 食品学院 第二法 大肠菌群平板计数法 检样 10倍系列稀释 选择2~3个适宜稀释度的样品匀液，接种VRBA培养基 计数典型和可疑菌落 BGLB肉汤 报告结果 36℃±1℃ 18h~24h 食品学院 第二法 VRBA平板计数法 选择15~150平板计数典型和可疑菌落 36℃±1 ℃ 18h ~24h 挑选10个菌落接种到BGLB 典型菌落为紫红色周围有红色胆盐沉淀环，0.5mm 食品学院 食品学院 平板法检验步骤 1. 样品的稀释 2. 选取2~3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接接种2个无菌平皿，每个平皿1ml。设置空白对照 3. 及时将15~20ml冷却至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于每个平皿中。待琼脂凝固后，再加3~4ml VRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于37℃培养18~24h。 食品学院 4. 平板菌落数的选择 15~150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。 5. 正式试验 从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别接种于BGLB肉汤管内，37℃培养24~48h，观察产气情况。产气可报告为大肠菌群阳性。 食品学院 大肠菌群平板计数的报告 经最后证实为大肠杆菌阳性的试管比例乘以相应平板计数的菌落数，再乘以稀释倍数，即为每 g（ml）样品中大肠菌群数。 例：10-4样品稀释液1ml，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g(ml)=6.0×105CFU/g（ml） 食品学院 第八节 细菌的生化反应检查法 由于细菌各自的酶系统不同，新陈代谢的产物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的细菌，这种试验称为细菌的生化反应试验。 食品学院 在培养物中加入某种底物与指示剂，经接种、培养后，观察培养基的pH值变化。 在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。 食品学院 生化试验的注意事项 1、待检菌应是新鲜培养物。培养18-24h。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。 4、应做必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2-3个待检的疑似菌落分别进行试验。 食品学院 糖（醇、苷）类发酵试验 β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 七叶苷水解试验 甲基红试验 V-P试验 一、碳水化合物代谢试验 食品学院 原理： 多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物（或产酸产气）－→pH↓ －→指示剂呈酸性变色（若产气者有气泡出现）。 培养基 指示剂 酚红（PH：6.8~8.4） 色泽变化（酸~碱：黄~红） 1. 糖（醇、苷）类发酵试验 食品学院 方法 将纯种细菌以无菌操作接种到含有指示剂的培养基中，置35℃温箱培养数小时至两周，观察结果 ↗ 伤寒沙门菌 ↖ 甲型副伤寒 食品学院 （二）固体样品的处理 捣碎均质法 剪碎振摇法 研磨法 整粒振摇法 胃蠕动均质法 食品学院 1. 捣碎均质法 将中样(≥100g)剪碎或搅拌混匀，从中取25g放入带225mL稀释液的无菌均质杯中，8000~10000r/min均质1~2min即可。 食品学院 2.剪碎振摇法 将中样(≥100g)剪碎或搅拌混匀，从中取25g检样进一步剪碎，放入带225mL稀释液和直径5mm左右玻璃珠的稀释瓶中，盖紧瓶盖，用力快速振摇50次，振幅要大于40cm。 食品学院 3.研磨法 将中样(≥100g)剪碎或搅拌混匀，从中取25g检样放入无菌乳钵中充分研磨后，再放入带有225mL无菌稀释液的稀释瓶中，盖紧盖后充分摇匀。 食品学院 4.整粒振摇法 直接称取25g整粒样品置于带有225mL稀释液和直径5mm左右玻璃