(仪器分析）9.3高效毛细管电泳的理论基础教程文件.pptVIP

第九章高效毛细管电泳分析法 9.3.1 PHCE基本原理 9.3.2 PHCE中的基本基本关系式 9.3.3 影响分离效率的因素 第三节高效毛细管电泳理论基础 High performance capillary electrophoresis,HPCE Basic theory of HPCE 9.3.1 高效毛细管电泳基本原理 电泳是指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度。迁移速度与哪些因素有关？ 当带电离子以速度ν 在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。 电场力：FE = QE 阻 力：F = f?e 故： QE = f ? e Q —离子所带的有效电荷； E —电场强度； ? e—离子在电场中的迁移速度； f —摩擦系数。 所以，带电离子在溶液中的迁移速度： 物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。 淌度μ ：单位电场强度下的平均电泳速度。 被分离组分的保留时间 t 为： μe ：电泳迁移率（电泳淌度,单位：cm2·V-1 ·s -1 ），E：电场强度，V：电压；L：毛细管长度（有效长度为 l ）。 Q为离子所带的静电荷,f为stokes阻力系数 对于球形离子： f = 6πηr Rs —离子的表观液态动力学半径；η —介质的粘度； 从上式可见，当毛细管长度一定时，带电离子的迁移速度与溶质离子的电荷、施加的电压、缓冲液黏度及带电离子的大小有关。电渗流是驱动离子运动的第二种作用力。 双电层与电渗流 石英毛细管柱，内充液pH3时，表面电离成-SiO-,管内壁带负电荷，形成双电层。 在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，由于这些阳离子实际上是溶剂化的，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，形成电渗流，速度ν电渗流。 2. HPCE中电渗流的流形 电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小），应避免毛细管两端出现高度差而改变流形，降低分离效率； 液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。 3. HPCE中电渗流的作用 电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍； 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： ?+ = ?e+ ?eo 阳离子运动方向与电渗流一致； ?- = ?e - ?eo 阴离子运动方向与电渗流相反； ν0 =ν ?eo 中性粒子运动方向与电渗流一致； （1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离； （2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，如同改变LC中的流速； （3）电渗流的微小变化影响结果的重现性； 在HPCE中，控制电渗流非常重要。 4.HPCE中影响电渗流的因素 (1)电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比，当毛细管长度一定时，电渗流速度正比于工作电压。 (2)毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同。 (3) 电解质溶液性质的影响 （a）溶液pH的影响 对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7，达到最大； pH3，完全被氢离子中和，表面电中性，电渗流为零。分析时，采用缓冲溶液来保持pH稳定。 （b）阴离子的影响 在其他条件相同，浓度相同而阴离子不同时，毛细管中的电流有较大差别，产生的焦耳热不同。 缓冲溶液离子强度，影响双电层的厚度、溶液粘度和工作电流，明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加，电渗流下降。 (4) 温度的影响 毛细管内温度的升高，使溶液的粘度下降，电渗流增大。 温度变化来自于“焦耳热”。 焦耳热：毛细管溶液中有电流通过时，产生的热量； HPCE中的焦耳热与背景电解质的摩尔电导、浓度及电场强度成正比。 温度每变化1?C，将引起背景电解质溶液粘度变化2%～3%。 (5) 添加剂的影响 （a）加入浓度较大的中性盐，如K2SO4，溶液离子强度增大，使溶液的黏度增大，电渗流减小。 （b）加入表面活性剂，可改变电渗流的大小和方向。 加入不同阳离子表面活性剂来控制电渗流。 加入阴离子表面活性剂，如十二烷基硫酸钠（SDS），可以使壁表面负电荷增加，zeta电势增大，电渗流