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大百合鳞片诱导不定芽影响因素研究 　　摘要以大百合鳞片为外植体材料，研究确定诱导鳞片形成不定芽的影响因素。结果表明：大百合鳞茎的中层鳞片启动与分化能力强，是最佳的外植体；以MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.20mg/L的培养基诱导启动效果最好，启动率为86.7%，能培养具有较强分化能力的不定芽5.3个。 　　关键词大百合；鳞片；不定芽植株再生；诱导 　　 　　大百合（Cardiocrinum giganteum）是百合科大百合属珍贵的多年生鳞茎花卉，因其植株粗壮高大，显著区别于百合属植物而得名[1]。大百合健美挺拔，花朵洁白硕大，美丽芳香，栽植群体的观赏效果极为壮观，在欧洲首次亮相就引起轰动，获得了“百合王子”的美誉[2]。然而，长期以来，这种极具观赏价值的野生花卉，却一直未受到世人的重视。近几年，经过引种驯化和人工栽培，已成为一种优良的观赏栽培植物[3]。大百合常规的繁殖方法是分球（新鳞茎）繁殖，??这种繁殖方法会导致鳞茎逐年变小退化，且繁殖速度极为缓慢，不宜频繁分栽。采用组织培养快速繁殖的方法，可以加快繁殖速度，对保护这一珍贵野生花卉种质资源以及在园林绿化中大规模推广应用具有重要意义。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料 　　试验材料为大百合的更新鳞茎，取自中科院植物研究所华西亚高山植物园。 　　1.2方法 　　1.2.1外植体消毒。将大百合的更新鳞茎置于冰箱内4℃下贮藏30d后取出，去掉最外面一层腐烂、褐化的鳞片，将根系切除。先用湿纱布轻轻地洗净鳞茎表面，然后将鳞瓣剥下，放入洗衣粉溶液中浸泡5min，流水冲洗2h，置于超净工作台上，先用75%的酒精消毒10s，再用0.1%的升汞消毒10~12 min（中间更换2次消毒液），无菌水冲洗4~5次后，将鳞瓣纵切成1.0cm2大小，再放入无菌水中冲洗掉渗出液，用无菌滤纸吸干表面水分，置于超净工作台上备用。 　　1.2.2诱导培养。将外植体以腹面向上和向下两种方式接种到MS培养基上进行培养，附加不同浓度的BA、KT和NAA。每瓶培养基接3个鳞片，每处理接10瓶，重复2次，30d后统计其污染率和启动率。 　　1.2.3培养条件。培养温度25±2℃，光照强度2 000Lx左右，光照时间14h/d。 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1不同鳞片部位对大百合诱导不定芽的影响 　　不同鳞片部位对大百合的诱导具有明显的影响。大百合鳞片下部靠近鳞茎盘的部位启动率最高，中部其次，而鳞片上部几乎不分化。外层和中层鳞片的启动能力明显高于内层鳞片，内层鳞片最早转绿，但转绿后基本上不分化，20d左右死亡。鳞茎不同鳞片部位的污染率也存在显著差异。内层和中层鳞片的污染率较低，外层鳞片因带内生菌多，污染率极高，即使诱导成功，在培养后期易发生污染，保存率低。以腹面向上的接种方式成活率和启动率高。综合来看，大百合的中层鳞片是组培外植体最佳材料来源（见表1）。 　　 　　2.2不同激素种类与水平对鳞片诱导启动的影响 　　接种7d后，白色的鳞块逐渐变绿并增厚，约20d左右鳞片近轴面边缘出现黄绿色圆形颗粒状愈伤组织（图1），并有白色的球状突起，不断增殖。1个月后，颗粒状的愈伤组织开始分化出淡绿色的不定芽（图2）。2~6个芽聚成芽丛，继而伸长，有的抽生出叶片，有的则以小鳞茎的形态存在。不同激素组合培养基中鳞片诱导统计结果见表2。 　　从表2可以看出，BA有促进不定芽形成的作用，KT对不定芽的形成也有一定作用，但不如BA显著。随着BA浓度的增加，平均每块鳞片分化的不定芽数量逐渐增多， 　　 　　BA浓度为2.0mg/L时，叶片不正常的扭曲或愈伤化严重。一定量NAA对不定芽叶片伸展比较有利，高浓度的NAA导致毛状根直接从外植体长出；随着NAA浓度增加，不定芽分化数量减少，当NAA浓度为0.5mg/L时，有愈伤组织出现。综合比较试验中的培养基，以MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.20mg/L作为大百合快速繁殖的初代诱导培养基为好，平均分化5.3个芽，诱导率达到86.7%，可以培养大量具有较强分化能力的不定芽。 　　 　　3讨论 　　 　　大百合属（Cardiocrinum）植物的组织培养研究目前报道甚少，试验结果表明，大百合鳞片的诱导培养，受极性支配，以鳞片基部和近轴端表现出最大的器官发生潜力，与百合属植物有一定的相似性[4-7]，其原因及影响机理尚待进一步研究。 　　大百合对外缘激素的反应十分敏感。BA与KT对大百合鳞片的诱导和不定芽的形成都有促进作用，但KT的作用效果不如BA明显。这可能是因为大百合细胞表面的激素受体有特异性，而且对BA的亲和力超过KT[8]。高浓度6-BA不利于芽的正常分化，导致叶片细长、扭曲，分化苗出现玻璃化现象