利用基因枪转化技术创造抗病大豆新材料(可编辑).doc

利用基因枪转化技术创造抗病大豆新材料 : : .: /:::.: : : : . 表达载体的构建.大豆再生体系的建立..不同基因型对大豆体细胞胚诱导的影响? ..优异基因型品种胚胎发生的特点?。 .基因枪介导的遗传转化? .转基因植株分子生物学检测.. 代转基因植株的检测 ..转基因大豆及对照总的提取.. .. 检测??. 代转基因植株表达量的. 讨仑?..东北农业大学理学硕士学位论文 .大豆未成熟子叶体细胞胚诱导的主要影响因素??一 .基因枪轰击大豆体细胞胚的影响因素? .标记基因选择.液体筛选优点??. .下一步工作展望? 结论?。 .构建了含基因植物表达载体.筛选出体细胞胚分化率较高的基因型大豆?. .获得了转基因大豆植株? 致谢??. 参考文献. 攻读硕士学位期间发表的学术论文..??.. . .??. .:? ..?.. ..??. .. ..? ..?...? .??:; .?.:; ..?. ..。 .. ..??. ..?.?.. ...?..??. .....??.??. ...?. .?.. ...?.... .?. ..??. ..?. .....。 . ” .??.?.??. . 。?.. ... ..... .?.?.??.? .?.. ?..?.??. ..独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中 不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得?? 注;翅没直其他盂要挂别直明的:奎拦亘窒或其他教育机构的学位 或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在 论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 日期:沙彦年 卫刚№ 占月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅 和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进 行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保 密的学位论文在解密后适用本授权书 学位论文作者签名:王对晦压 日期:矽眵年月日 导 师 签摘要 摘 要 大豆是世界上重要的经济作物,随着人口的增长对大豆的需求量在不断的增加。病害一 直是严重影响大豆产量和品质的重要因素之一,危害根部病害主要是:立枯病、猝倒病、萎 枯病,据调查每年由于根腐病造成大豆减产在%左右,严重影响大豆产业的发展。因此,如 何提高大豆的抗病性是人们亟待解决的问题,传统育种方式虽然能解决大豆的抗病性,但是 需要的时间长,新培育的品种抗性比较单一,通过栽培管理和喷施农药在一定程度上能够减 少大豆病害的影响,但是长期喷施农药不仅污染环境,而且会提高植物病原菌的抗药能力。 随着分子生物学的发展,人们对植物抗病基因工程研究的不断深入,人们可以有目的的 将抗病基因转入植物体内,用来提高植物广谱的、持久的抗病能力。同时还为大豆的育种提供新的种质资源,植物病原细菌的 基因编码 蛋白能诱导植物产生一系列抗性反应,使植物获得广谱的抗病能力和促进植物的生长。 蛋白是受基因调节并通过Ⅱ型泌出通道分泌的一类蛋白质,它们的共同特点是:富 含甘氨酸,对热稳定,对蛋白酶敏感。是从丁香假单胞菌烟草致病变种 .菌株中克隆,该基因大小约为,能在烟草上引起过敏反应诱导 植物的抗病性。 体细胞胚是基因枪转化方法重要的靶组织,主要是通过未成熟子叶体细胞胚诱导途径发 生,体细胞胚的诱导对大豆的基因型有很大的依赖性。不同大豆基因型诱导体细胞胚的质量 是有差异的。基因枪转化方法不仅转化效率高且操作简单,是大豆重要的遗传转化方法之一。 本试验构建了植物表达载体,选取北方个春大豆进行体细胞胚诱导,利用 基因枪方法将基因转入大豆未成熟子叶体细胞胚中。并对转基因植株进行了分子生物学 检测。结果表明: .垦丰的体细胞胚的发生率最高为.%,并且体细胞胚鲜绿色呈葡萄状、每个未成熟 子叶上的体细胞胚数目多,是大豆遗传转化理想受体材料。体细胞胚发生率为%%有 合丰等个基因型:登科等个基因型无体细胞胚发生率。 .以垦丰为受体,采用基因枪转化技术,检测,获得转化质粒的转基 因植株株。 .利用荧光定量对株转基因植株进行实时检测,在转基因植株均有不同程 度的表达。 关键词基因:体细胞胚:基因枪法:植物抗病基因工程;分子生物学检测东北农业大学理学硕士学位论文,. . , , , % , ,, , ,, . , , ,. ,. , : , , . .. ,. , . .. . , ., , :. , .,, ,, . 摘要. , ~%. ,.