仿刺参卵多肽 多糖的制备及多肽活性分析-preparation and activity analysis of polypeptide polysaccharides from stichopus japonicus eggs.docxVIP

纯化，分离得到一个无拖尾的多糖峰，采用葡聚糖凝胶G-200在线检测，结果显示只有一个谱峰。使用标准葡萄糖进行洗脱对比，得出仿刺参卵纯化后的多糖分子质量大于200KDa。通过本实验获得了分子质量相对集中的仿刺参卵纯化多糖。4.梯级肽制备及其活性研究通过超滤法分离制备得到三种截留分子质量范围的梯级肽，即F1：分子质量1～10KDa的多肽、F2：分子质量650Da～1KDa的多肽和F3：分子质量﹤650Da的多肽，三种梯级肽的得率分别为F1：0.737%、F2：0.295%及F3：0.515%(鲜重)。对分离得到的仿刺参卵梯级肽进行了化学抗氧化研究和细胞活性研究，化学抗氧化结果显示，F1、F2及F3均体现出较强的清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基能力，并且在一定浓度范围内呈现量效关系。其中F1与F2和F3相比表现出明显较高的DPPH?和O2-?的清除能力，而在清除?OH的能力方面3个组分基本相似。细胞活性结果显示，仿刺参卵多肽三个组分对巨噬细胞都起到一定的增殖作用，且终浓度为100、200、400μg/mL的样品对过氧化氢损伤的巨噬细胞保护作用非常明显，三个样品的吸光度值与模型组相比为极显著差异(P0.01)，仿刺参卵梯级肽在细胞活性上F1组分略好于另外两个组分。5.多肽纯化及理化分析F1组分经过Tricine-SDS电泳分离，结果显示F1有多条条带，分子质量集中分布在6.5～35KDa之间。然后使用高速逆流色谱法分离F1得到4个独立的谱峰，通过测定其四个组分清除自由基能力，得出F1四个组分的自由基清除能力均高于三种梯级肽，其中F1-1组分清除?OH的能力最强，当浓度为5mg/mL时，清除?OH的能力达到了82.95U/mL。将F1-1先后经过SephadexG-100和SephadexG-50进行分离纯化后，得到三个组分，其中F1-1-3是一个窄高峰，含量是三个组分中最高的。实验发现F1-1-1和F1-1-3表现出较强的清除?OH的能力，且都高于F1-1。当F1-1-3浓度为5mg/mL时，清除?OH的能力达到了89.82U/mL。F1-1-3经过Tricine-SDS电泳分离检测，显示出一条清晰无拖尾条带，说明F1-1-3已经达到电荷均一。与标准分子质量蛋白对比得出，其分子质量在30KDa左右。紫外全波长扫描显示F1-1-3在紫外有两处吸收峰，分别是肽键和苯丙氨酸的特征吸收位置，使用反相高效液相色谱法在214nm分析检测F1-1-3，结果显示其是一种较纯的物质。关键词：仿刺参卵，酶解，多糖，多肽，纯化，HSCCC，细胞活性，化学抗氧化PreparationsofpeptideandpolysaccharideandactivitiesresearchofApostichopusjaponicusSpawnpeptideABSTRACTInthisdissertation,gonadswhichwerebyproductsofprocessedApostichopusjaponicuswereselectedasresearchmaterials.Spawnandspermweredifferentiatedthroughamicroscope,whosenutrientcompositionswereanalyzed.Theenzymatichydrolysistechnologiesofspawnwereoptimized.Duringpreparingstep,polysaccharidesandcascadepeptideswerefirstlyultrafiltered.Thenchemicalantioxidativeactivitiesandcellprotectiveactivityofcascadepeptideswerestudied.Finally,yieldandantioxidativeactivitywereselectedasdirectionsforpeptideseparationandpurification.NutrientsdetectionoftheApostichopusjaponicusgonadsNutrientsofApostichopusjaponicusspawnwerebalanced,inwhichcrudeproteinwas50.72g/100gandcrudepolysaccharidewasupto27.25g/100g.Phospholipidswerethemainpartsofcrudefat.Byhighperformanceliquidchromatography(HPLC)analysis,thetotalamountsofaminoaci