脑胶质瘤中nanog与cd133 gfap的表达及其相关性的研究-expression and correlation of nanog and cd 133 gfap in glioma.docxVIP

英文缩略词表英文缩写英文全称中文名称BTSCsBrain tumor stem cells脑肿瘤干细胞ESCsEmbryonic stem cells胚胎干细胞GBMGlioblastoma胶质母细胞瘤PBSPhosphate buffered solution磷酸盐缓冲液DAPIDiamidine-phenyl-indolel二脒基苯基吲哚iPS cellsinduced pluripotent stem cells诱导多能干细胞DAB33′-diaminobenzidine3，3-二氨基联苯胺PCNAProliferating Cell nuclear增殖细胞核抗原FITCFluorescein isothiocyanate异硫氰酸荧光素BCIP/NBT5-bromo-4chloro-3indolyl-phosp hate/nitro-blue-tetrazolium5-溴-4 氯-3 吲哚磷酸盐/氯化硝基四氮唑GFAPglial fibrillary acidic protein胶质纤维酸性蛋白bFGFfibroblast growth factor成纤维细胞生长因子脑胶质瘤中 NANOG 与 CD133、GFAP 的表达及其相关性的研究中文摘要目的 检测 NANOG、CD133、GFAP 在体内胶质瘤组织中的共表达，探讨 NANOG 基因与 CD133、GFAP 之间的表达关系；培养鉴定 U87 细胞系中肿瘤干细胞，在 体外细胞系水平上探讨 NANOG 与 CD133 的共表达关系，分析 NANOG 在胶质瘤 的发生发展中所起到的作用。方法 (1)采用双重免疫组化法检测 NANOG、CD133、GFAP 在 60 例胶质瘤组织 中的共表达情况，计算 NANOG+细胞、CD133+细胞、GFAP+细胞、NANOG+/CD133+ 细胞和 NANOG+/GFAP+细胞所占的百分比，并将各阳性指标的表达进行统计学分 析。(2)血清剥夺的方法培养 U87 中胶质瘤干细胞，观察细胞肿瘤球的形成过程； 将肿瘤球接种于血清培养基，观察其在体外的分化特点；免疫荧光鉴定血清剥夺 后尚存的细胞、增殖形成的肿瘤球细胞和分化细胞。(3) 采用双重免疫细胞化学染 色检测肿瘤干细胞球中 NANOG 和 CD133 的共表达情况，分析两者之间表达关系。结果(1)在不同病理级别人脑胶质瘤中 NANOG+、CD133+和 GFAP+细胞百分比差 异有显著性，并且 NANOG+表达与 CD133+表达呈正相关(r=0.904，P＜0.001)， NANOG+表达与 GFAP+表达呈负相关(r=-0.907，P＜0.001)。随着病理级别的升高， NANOG+/CD133+ 细胞百分比差异有显著性 (F = 560.805 ， P ＜ 0.001) ， NANOG+/GFAP+ 细胞 (F=0.355 ， P ＞ 0.1) 百分比差异没有统计学意义，并且 NANOG+/CD133+表达与 CD133+表达呈正相关(r=0.823，P＜0.001)。(2) 应用血清 剥夺的方法成功地筛选出了表达 CD133 的肿瘤干细胞，并能增殖形成肿瘤球；肿瘤球可多向分化，子代细胞表 GFAP 和 NSE；双重免疫细胞化学染色发现 NANOG和 CD133 在肿瘤干细胞球中共表达，在干细胞球周边呈现半分化状态的细胞仅表 达 CD133 而未表达 NANOG。结论 (1)在不同级别脑胶质瘤中NANOG呈现阳性表达，与脑胶质瘤干细胞标记物 CD133之间有明显的相关性，并且脑肿瘤CD133、NANOG阳性细胞的比率和肿瘤 的恶性程度有关，有CD133阳性表达的肿瘤组织同时亦表达NANOG，并且存在细 胞水平上的共表达。在胶质瘤病理分级中，NANOG+表达与GFAP+表达水平呈负相 关。高表达NANOG的组织，GFAP的表达水平相对较低，绝大部分的细胞没有 NANOG和GFAP共表达，不同病理级别中NANOG+/GFAP+细胞百分比差异无统计 学意义(2) U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞；首次 采用血清剥夺的方法成功地从胶质瘤细胞系U87中分离筛选出胶质瘤干细胞并增 殖形成肿瘤球。双重细胞免疫组化发现NANOG和CD133在干细胞水平上共表达， NANOG在肿瘤干细胞中高表达，在分化细胞中不表达，可能在维持干细胞的未分 化状态中发挥了非常重要的作用。关键词 NANOG 双重免疫组化 CD133 肿瘤干细胞 U87The expression and relationship of NANOG,CD133 and GFAP in gliomasAbstractObjectiveThe co-expression of NANOG、CD13