氨基酸分析技术的发展与应用.pdfVIP

基酸分析技术的发展与应用 基酸分析技术的发展与应用 常碧影 中国农业科学院分析测试中心 中国仪器仪表学会农业分会 基酸分析技术的发展与应用 基酸分析技术的发展与应用 一、概述-背景材料 二、氨基酸分析技术的发展 1 仪器技术 传统的氨基酸分析(IEC)法 柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)法 2 样品前处理技术 三、氨基酸分析的应用 概 论 概 论 什么是 基酸 从化学角度：氨基酸是分子结构中既有氨基(-NH2 ) 又有羧基(-COOH)的一类有机化合物 从生命科学的角度：氨基酸是组成蛋白的基本单 元， 基酸通过肽键相互连接形成肽和蛋白-即构 成各种生物体细胞、组织，如脑、神经、血液、激 素、酶以及肌肉等的基本材料 生命是蛋白体的存在方式，这种存在方式的实质就 是这些蛋白体化学成分的不断自我更新 恩格斯 “蛋白体的化学成分”就是 基酸，而“不断自我更 新”就是 基酸的不断的重新组合。 为什么进行氨基酸分析 地球上近150万种动物、30万种植物和20万种微生物 虽然生物种类如此繁多，其外部形态、内部结构、 生活习性、繁衍方式千差万别，但本质只是一个 氨基酸的组合方式和组合过程差别。要探讨和揭示 生命现象的发生、成长、新陈代谢、遗传变异等过 程，就离不开对 基酸的分析与研究。 随着科学的发展和社会的进步，许多相关的领域， 如农业、医药、考古、地质勘探、宇宙探秘等，为 了生命的需求、健康维系、与自然的和谐相处，也 需要 基酸分析。 氨基酸已深入人们的生产与生活， 基酸分析已成 为产品开发、QC/QA和生产管理的重要手段 氨基酸分析技术的研究与发展 氨基酸分析技术的研究与发展 v氨基酸结构特点 R CH COO- NH + 3 高极性(色谱柱上不保留) 数量又多, 自然界 基酸有300多种, 仅天然蛋白氨基 酸就有20多种，生理体液常有40~50种需同时分离 R-结构各异：(C ~C 脂肪/芳香/杂环、含硫？) 2 11、 酸性~ 中性~碱性，稳定性不同 有些又十分相近(分离困难） 两性：离子交换色谱 无发色团 不能用比色(UV/Vis)直接检测(检测困 难) 、必须衍生, 变成可检测的化合物 v氨基酸分析的两条最主要技术思路 离子交换色谱+柱后衍生(IEC)法 阳离子交换树脂/ 阴离子交换树脂 柱后衍生—茚三酮反应（Vis检测） 邻苯二甲醛反应（荧光检测） 电化学检测--积分脉冲安培检测 柱前衍生+反相高效液相色谱(RP-HPLC)法 氨基酸与衍生剂反应 形成可检测的化合物 氨基酸接上较大的疏水基团 在反相柱上保留、分离 离子交换色谱法-1 离子交换色谱法-1 q分离原理与机制 在酸性介质（pH2.2）中 R—CH—COOH +H+ R—CH--COOH NH NH + 2 3 与离子交换树脂—磺化苯乙烯-二乙烯基苯聚合物中 的磺酸基--SO3-结合, 而保留在分离柱上, 随着流动相 pH(和离子强度) 的逐步增高达