高效双价bt cpti植物表达载体的构建及其在棉花中的表达分析-construction of high-efficient bivalent bt cpti plant expression vector and its expression analysis in cotton.docxVIP

高效双价(Bt+cpti)植物表达载体的构建及其在棉花中的表达分析摘 要棉铃虫的持续性爆发给棉花生产造成了灾难性的损失，如何有效防治虫害一直是提 高棉花产量面临的一个巨大问题。20 世纪 90 年代，人们通过生物工程手段将抗虫基因 构建到合适的植物表达载体上，并转化棉花获得转基因抗虫棉。如中国农业科学院生物 技术研究所郭三堆研究员课题组先后获得了单价 Bt 抗虫棉和双价 Bt、cpti 抗虫棉，不但 减少了农药使用量，提高了棉农的经济效益，而且对环境无污染，大大提高了棉花的抗 虫性，在生产上得到了广泛的推广。然而，随着抗虫棉的大面积种植，不论是单价还是双价，种植一定年限后，害虫也 会对其产生相应的抗性或者耐受性，使得农业生物技术再次面临严峻的考验。针对这种 情况，有人在待表达外源基因的两端加上信号肽序列，通过外源基因在植物体内的定向 运输而提高外源基因在植物体内的积累量。Alexander Schouten 等 1996 年将一个单链抗 体（scFv）的 C 端增加了内质网滞留信号肽（KDEL）序列，结果显示带有信号肽的基 因其蛋白表达量提高了近 1%。基于这种情况，本论文开展了如下研究：1. 以实验室已有的双价基因为基础，在 cpti 基因的 5’端增加了大豆胰蛋白酶抑制剂（SKTI）信号肽序列，而在其 3’端增加了内质网滞留信号肽（KDEL）序列，同时在Bt 基因的 5’端增加