血清胰岛素检测方法的对比分析及临床意义分析-comparative analysis and clinical significance analysis of serum insulin detection methods.docxVIP

血清胰岛素检测方法的对比分析及临床意义分析-comparative analysis and clinical significance analysis of serum insulin detection methods.docx

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血清胰岛素检测方法的对比分析及临床意义分析-comparative analysis and clinical significance analysis of serum insulin detection methods

学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日前言胰岛素检测对于糖代谢疾病的研究有着重要的作用,尤其是在低血糖病因分析、糖尿病的发病机制研究以及评估胰岛β细胞分泌功能方面有重要的作用,其中动态测量β细胞储备胰岛素有助于临床确定糖尿病的病情和治疗方案。目前实验室检测胰岛素的种类比较多,但常用方法有放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法、电化学发光法等[1]。许多研究显示,不同的检测方法或检测系统在检测胰岛素的灵敏度、特异性和稳定性等方面均存在显著差异,给临床采用胰岛素检测结果进行辅助诊断和治疗监测可能带来了一些偏差或使临床医生及病人产生困惑[2]。尽管胰岛素检测的实验研究已有50多年的历史,但迄今为止血清胰岛素的测定标准化问题仍没有解决。许多研究显示,不同的胰岛素检测方法之间产生的差异非常大,即使使用同一种方法,甚至同一种试剂盒,不同的实验室检测同一份血样,胰岛素含量的测定值也相差很大。许多研究表明,造成胰岛素检测结果差异的原因是多方面的,包括免疫技术差异、参考标准试剂差异,也有病人血液多种成分的干扰(尤其胰岛素自身抗体等)和其他样本的特殊性问题。本研究通过对目前临床实验室常用的四种胰岛素免疫检测方法进行系统性分析比对,研究不同方法之间检测结果的差异性,分析产生差异的原因,探讨这些差异是否直接影响了临床诊断糖尿病或者判断胰岛β细胞分泌功能。材料和方法一.患者血样资料随机选择51名来我院就诊的患者,男22例,女29例;平均年龄47.5(27~85)岁。共采集血清样本152份,其中正常糖耐量患者12人,血样42份;空腹血糖升高或糖耐量下减者17名,血样54份;2型糖尿病的患者21名,血样56份。所有患者均采集静脉全血3ml于普通玻璃管中,半小时后对血样离心分离(×2000g,10分钟),血清置-80℃冰箱保存。在进行胰岛素测定时解冻至4℃冰箱保存,并在48小时内完成比对检测。静脉快速推注精氨酸(Arg)仅诱发快速胰岛素分泌相(AIR),而静脉滴注Arg可诱发胰岛素双相反应。第一相(即AIR)是Arg刺激后短时间(2~5min)内,出现的一个胰岛素快速分泌阶段,将胰岛细胞储存的胰岛素释放进入血液循环,循环中胰岛素浓度快速升高也较快下降。AIR反映β细胞储备的胰岛素对急性刺激产生反应的能力,即β细胞的分泌能力。精氨酸刺激试验是以2~6min胰岛素(C肽)均值与空腹胰岛素(C肽)的差值来评价β细胞分泌功能[3]。选择14例接受精氨酸刺激试验的患者,分别计算四种检测方法检测的各时点血清胰岛素的平均值,分析不同的血清胰岛素检测方法对临床判断糖尿病患者胰岛β细胞分泌功能是否有影响。二.质控标本采用Bio-RADLyphochekImmunoassaypluscontrol的胰岛素冻干质控品,分低、中、高三种浓度水平LOT:40170。将质控品按操作要求溶解后等同于血清样本一起进行随机检测,并进行五天的连续检测,分别计算各检测方法检测胰岛素低、中、高浓度质控品的平均值、变异系数及总变异系数以及与原始参考值之间的差异。三.仪器及试剂四种检测方法和配套试剂的相关信息统计参见表1。四种检测方法的灵敏度、定标曲线和发光值及室内质控检测值均在本实验室可控范围内。表1:四种检测方法的相关资料供应商检测设备样本量(uL)测定方法检测灵敏度(uU/mL)最高检测浓度(uU/mL)Linco放射免疫100RIA(M)2.0200测量仪BayerADVIA25CLIA(A)0.5300CentaurRocheInsulin20ECLIA(A)0.21000E2010DiasorinLiaison50CLIA(A)0.23500注:1.四种胰岛素分析法都依据世界卫生组织(WHO)IRP66/304进行标准化。2.RIA:放射免疫分析法;CLIA:化学发光免疫分析法;ECLIA:电化学发光免疫分析法。四.统计分析所有的统计分析均在SAS8.2上完成。对四种胰岛素检测方法的测量值进

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